micro #4




INSTITUTO TECNOLÓGICO DE ESTUDIOS SUPERIORES DE ZAMORA

INGENIERIA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

PRÁCTICA 3: PREPARACIÓN, FIJACIÓN Y COLORACION SIMPLE DE FROTIS

Q.F.B. ANA MARIA ALVARADO

Integrantes:
Laura Susana Ríos Guzmán.
Alejandro Alonso Ayala.
Karla Edith García Álvarez
Miriam Zaray Romero Alonso





ZAMORA, MICHOACAN, 7 DE ABRIL DEL 2014




Materiales
1probeta de 100 ml
1 vaso de precipitados de 100 ml
1 parrilla de calentamiento
1 mechero
5 portaobjetos
1 piceta con agua destilada
Cristal violeta
Safranina
Lugol
Solución de alcohol-acetona
Verde de malaquita
Tinta china
Fenol 2%
Aceite de inmersión
Microscopio compuesto de campo claro
Procedimiento
El profesor proporcionará a los alumnos cultivos liquidos y solidos de:EscherichiaColi, StreptococcusSp., StaphylococcusSp., BacillusSubtillis Y KlebsiellaSp.
El estudiante preparara frotis de cultivo sólido y de cultivo liquido de cada microorganismo y aplicara la tinción de Gram
También realizara la tinción selectiva de endosporas en un frotis fijado al calor de BacilliusSubtillisy la tinción negativa en cultivos de KlebstellaSp.
Tinción Diferencial De Gram
a)Cubrir el frotis con 2 gotas de cristal violeta durante 30 segundos a 1 minuto
b) Lavar cuidadosamente el frotis con agua de la llave o destilada para eliminar el exceso de colorante
c) Sacudir un poco y sin dejar secar cubrir el frotis con 2 gotas de lugol por 30 segundos
d) Lavar cuidadosamente el frotis con agua
e) Inclinar el portaobjetos y aplicar gota a gota el decolorante dejando queescurra hasta que no fluya ,as tintura
f) Inmediatamente lavar con agua
g) Aplicar 2 gotas de safranina durante 30 segundos
h) Lavar nuevamente con agua, eliminar cuidadosamente el exceso de agua con una toalla de papel y dejar secar el aire.

Observaciones al microscopio:

1. Limpiar cuidadosamente los objetos y ocular del microscopio con papel seda.
2. Colocar los portaobjetos en laplatina y empezar a localizar la preparación con el objetivo de 10x, posteriormente pasar al de 40x. para observar con el objetivo de 100x colocar previamente una pequeña gota de aceite de inmersión sobre la preparación.
Al finalizar las observaciones, limpiar cuidadosamente el objetivo con papel seda para eliminar el exceso de aceite y evitar incrustaciones que dañan a estos sistemas.
INTRODUCCIÓNLa tinción propuesta por el médico danés Christian Gram en 1884, es una de las tinciones diferenciales más utilizadas en bacteriología, que clasifica los cultivos bacterianos de menos de 24 horas en Gram positivas y Gram negativas. El método se fundamenta en el hecho de que el coloran- te primario (cristal violeta) tiñe por igual a todas las bacterias, pero la combinación con el colorante es máspermanente en los gram positivos.

Para establecer la diferenciación en estos dos grupos, se aplica un disolvente del colorante primario que no tiene efecto sobre el grupo de microorganismos que lo retienen firmemente, pero lo elimina de aquellos que no son capaces de retenerlo, quedando por lo tanto completamente decolorados. En estas circunstancias, sería muy difícil su observación por lo que espreciso tratarlos con otro colorante llamado secundario, como la safranina. Este colorante no modifica el color de los microorganismos que habían retenido el color primario, pero tiñe a los microorganismos decolorados.

Estas diferencias de tinción de las bacterias se explican por cambios en la composición química y estructura de las paredes celulares, que facilitan la retención o eliminacióndel colorante primario después del proceso de decoloración.

Otras tinciones que permiten obtener mayor información son la negativa y la selectiva. La tinción negativa facilita las observaciones de la morfología y tamaño de las bacterias sin alteración por efecto del calor así como de estructuras especiales, como la cápsula de algunas especies bacterianas. La cápsula también llamada glicocálix...