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CULTIVO DE MICROORGANISMOS – SIEMBRAS

I. OBJETIVO

Aprender las principales técnicas de siembra de microorganismos y las condiciones de incubación.

Aplicar la técnica adecuada para preparar el área de trabajo y evitar contaminaciones.

II. FUNDAMENTO

El cultivo de los microorganismos es el proceso por el cual se facilita la propagación de estos organismos en el laboratorio, brindándose losnutrientes necesarios para su desarrollo.

III. MARCO TEORICO

Para cultivar adecuadamente los microorganismos se debe reproducir en el laboratorio las mejores condiciones del ambiente natural que favorecen la proliferación de los microorganismos. Esto es, se deben preparar los mejores medios de cultivo y brindar la temperatura, aireación y otros factores ambientales más favorables durante el tiempode incubación.

SIEMBRA: es la operación por la cual se ponen en contacto a los microorganismos con el medio de cultivo.
La siembra debe realizarse teniendo en cuenta una serie de precauciones para evitar la contaminación. La regla de oro de un buen trabajo en microbiología es mantener condiciones estériles haciendo uso de la “TÉCNICA ESTÉRIL” o “TÉCNICA ASÉPTICA”.

Algunos puntos que se debetener especial cuidado durante la “TÉCNICA ESTÉRIL”: muchas veces se trabajan con microorganismos patógenos que pueden contaminar a los manipuladores; el aire, los manipuladores y los utensilios están densamente poblados por microorganismos que pueden fácilmente llegar a las muestras de estudio y contaminarlas.
Los cultivos de los laboratorios contienen sepas puras que deben mantenerse como talespara garantizar la fidelidad de las determinaciones.

Al realizar una siembra se debe tener cuidado de no introducir microorganismos extraños a las muestras ni dejar salir los microorganismos que están siendo cultivados en los laboratorios.

Las precauciones mínimas que se deben tener en cuenta para realizar una buena siembra son:

Trabaje en un ambiente cerrado, libre de corrientes de aire.
Trabajecerca de la llama del mechero.
No hable.
Flamee la boca de los frascos y los tubos antes y después de tomar las muestras.
Esterilice a la llama las agujas o asas de kolle antes y después de tomar los inóculos.
Trabaje sólo con materiales y medios de cultivo garantizadamente estériles.

CLASES DE SIEMBRA: existen dos tipos.

A. SIEMBRAS DE TRASPLANTE
B. SIEMBRAS DE AISLAMIENTO

A. SIEMBRA DETRASPLANTE O REPIQUE

Consiste en colocar al microorganismo ya aislado en un nuevo medio de cultivo (estéril) a fin de conservarlo a través del tiempo, lo que permitía realizar diferentes estudios tales como pruebas bioquímicas, morfología, coloración, identificación taxonómica, etc. Se hace con la finalidad de mantener viable a unos microorganismos, que se tiene cultivando en el laboratorio.
El cultivoprevio, generalmente corresponde a un solo tipo de microorganismos, que recibe el nombre de CEPA, CLONA o simplemente CULTIVO PURO, y no puede ser mantenido por mucho tiempo sin renovación de nutrientes ni eliminación de sus productos de desecho, por lo que se hace necesario sacar unos cuantos microorganismos y llevarlos a un nuevo medio de cultivo.
En el laboratorio, los repiques se hacen detubo a tubo y se siguen los siguientes pasos:

TÉCNICA DE TRASPLANTE:

1. Esterilice la aguja de Kolle hasta que se ponga rojo.
2. Destape el tubo con la cepa y pasarlo por la llama del mechero unas dos o tres veces.
3. Introducir la aguja de Kolle y tomar el inoculo.
4. Flamee nuevamente la boca del tubo y taponarlo convenientemente.
5. Tomar el tubo con el medio virgen, destaparlo y flamearlo 2 ó 3veces a la llama del mechero.
6. Introducir la aguja de Kolle y extender la masa microbiana depositando suavemente en la superficie del agar, haciendo una estría en zigzag en toda el área expuesta.
7. Flamee nuevamente la boca del tubo y taponarlo.
8. Esterilice en la llama del mechero la aguja de Kolle hasta que se ponga al rojo.
9. Ponga en estufa de incubación a la temperatura más favorable...