Micro de los alimentos








Facultad de Ingeniería.

Carrera: Técnico Universitario en Tecnología de los Alimentos.

Alumnos:

CARDOZO, Nélida.

CARMONA, Soledad.

CONDORI, Karina.

Profesora: GOMEZ, Silvia.

Año: 2.012.


TRABAJO PARACTICO Nº1.
Aislamiento e identificación de Escherichia coli en superficie y Staphylococcus aureus en mucosa intestinal.
Introducción.
Escherichia coli esuna bacteria Coliformes de la familia de los Enterobacteriaceas, Gram(-), que tiene por hábitat el intestino de los animales de sangre caliente. Es anaerobia facultativa, no forma esporas, es móvil, y capaz de fermentar la glucosa como la lactosa.
Su presencia en alimentos sirve como índice de contaminación reciente, en general de origen fecal. (no sobrevive a la pasteurización, ni a lastemperaturas bajas de almacenamiento).
Objetivos:
Aislamiento e identificación de Escherichia coli.
Entender los principios y usos de las pruebas bioquímicas para la identificación de microorganismo.
Materiales.
Autoclave y estufa.
Placas de petri.
Tubos de ensayo.
Bolsas ziploc.
Ansa y aguja.
Mecheros y tela de amianto.
Muestra: morcilla.

Medios de cultivos.
Medio VBBL.
Medio EMB.
MedioSIM.
Medio MR.VP.
Medio Simons Citrato.
Medio Baird Parker.
Medio Manitol salado.

Investigación de Escherichia coli.
Investigación presuntiva en caldo VBBL.(Verde Brillante Bilis Lactosa).
Fundamento del medio: Es un medio recomendado para recuento de Coliformes. El Bilis y el Verde Brillante son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de bacterias Gram + y Gram - a excepciónde Coliformes y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable.
Esquema de siembra:

Resultados:

Positivo, hubo formación de gas. Mientras que el tubo se observo turbio.


Aislamiento en medio.EMB (Eosina Azul de metileno).
Fundamento del medio: Medio de cultivo selectivo utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram – y escasas exigencias nutricionales permiten el desarrollode todas las especies de la familia Enterobacteriaceas. La eosina y el azul de metileno son los agentes selectivos ya que ejercen un efecto inhibitorio sobre una amplia variedad de bacterias Gram +. Mientras la lactosa y sacarosa son los agentes diferencial, que permiten la diferenciación entre organismo capaces de utilizar la lactosa y sacarosa de aquellos que son incapaces.
En caso decrecimiento de E. coli se observan colonias típicas, verde brillo metálico (complejo formado entre ác. Láctico y eosina), con centro negro azulado.
Esquema de siembra:




Resultados: Negativo no se sospecha de colonias típicas.

Pruebas bioquímicas:
Las  pruebas bioquímicas son un conjunto de reacciones que determinan la actividad de una vía metabólica de la bacteria a partir de un sustrato quese incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer transforma o no. Para ello,  hay que partir de un cultivo puro obtenido en el aislamiento, subcultivando de una colonia bien aislada.


A partir de otro placa otorgada por la profesora. Se realizaron las siguientes pruebas.
A. Prueba del indol en medio SIM (sulfuro indol movilidad).
B. Prueba Rojo de Metilo en medo MRVP (rojo demetilo voges proskauer).
C. Prueba del citrato en medio Simons citrato.


A.


B. Prueba del indol en medio SIM (sulfuro indol movilidad).
Fundamento del medio: Medio semisólido destinado para la diferenciación de movilidad, producción de indol y sulfuro en el mismo tuvo.
Las cepas móviles pueden apreciarse en este medio por la turbidez que produce alrededor de la punción de siembra,mientras que aquellas sepas productoras de sulfhídrico se distingue por la formación de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato del medio. Mientras que para la determinación de indol, se determina si la bacteria posee enzima triptofanasa que hidroliza el triptófano en indol y alanina. El indol producido se combina con el aldehído del “Reactivo de Kovacs” para originar un...