Micro

Institución Certificada
Norma ISO 9001:2000
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DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR TECNOLÓGICA
INSTITUTO TECNOLÓGICO SUPERIOR DE CENTLA

JEFATURA DE CARRERA DE ING. AMBIENTAL

MICROBIOLOGIA:
UNIDAD 7 BIOLOGÍA MOLECULAR
PRESENTA
IVETT CARAVEO MARTINEZ NUM. DE CONTROL: 10E50273

INSTITUCIÓN
INSTITUTO TECNOLOGICO SUPERIOR DE CENTLA

SEMESTRE
4to SEMESTRE GRUPO “B”ASESOR INTERNO:
HILDA BEATRIZ POLANCO MINAYA
PERIODO: FEBRERO – JUNIO 2012

7.1 HERRAMIENTAS MOLECULARES.
Cuando se desea comparar a dos o más individuos de una misma especie o a especies diferentes pero emparentadas filogenéticamente, si se planea elaborar un mapa genético de alguna especie, y/o ubicar genes dentro de los cromosomas; se puede acudir a varias técnicas que permiten detectardiferencias en el ADN de los individuos involucrados en el estudio.
Las técnicas más conocidas son: RFLP (Restriction Fragment Lenght Polymorphism), RAPDs (Random Amplified Polymorphic DNA) y AFLP (Amplified fragment-length Polymorphism) por sus siglas en inglés. Otra técnica más reciente es la conocida como microsatélites (SSR-Simple Sequence Repeats).
Estas técnicas sirven de basepara la elaboración de mapas genéticos donde se pueden ubicar posteriormente locus relacionados con características cuantitativas (QTL -Quantitative Trait Loci-) y, en etapas más avanzadas, la identificación, aislamiento y manipulación de genes deseables. La determinación de estos QTL ha permitido identificar Loci relacionados con el número de semillas por fruto, peso de semillas, área foliar ytal vez los más interesantes son aquellos relacionados con resistencia a patógenos.
* RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism)
El RFLP ha sido una técnica usada en los programas de investigación desde los años setenta. Es una técnica que permite distinguir organismos entre sí, mediante el análisis de los patrones que se derivan al romper el ADN en pequeños fragmentos. Si dos organismosson diferentes, en la distancia que exista entre dos sitios de ruptura particular, la longitud de los fragmentos generados será distinta cuando el ADN se digiera o rompa con una enzima de restricción. La similitud de los patrones generada puede ser usada entonces para diferenciar especies e inclusive razas entre sí.
Su metodología consiste en los siguientes pasos:
1. El ADN es extraído delas hojas de las plantas a examinar, o de la sangre de los individuos que se quiere comparar.
2. El ADN de la muestra es cortado en fragmentos, que resultan ser de tamaños diversos, precisamente porque estos tamaños dependen de la diversidad y variabilidad genética de la muestra. El nombre RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) deriva de la propiedad de ciertas enzimas llamadas “derestricción” para cortar regiones específicas del ADN que son muy variables (hipervariables) de individuo a individuo, lo que ayuda a detectar precisamente el polimorfismo que se está buscando.
3. Los fragmentos de ADN son colocados en una superficie gelatinosa (gel de agarosa) con el propósito de someterlos a una separación con base en su diferente tamaño.
4. Se sumerge el gel en unasolución conductora y luego se aplica una corriente eléctrica a lo largo del gel. A este proceso (pasos 3 y 4) se le llama “electroforesis”.
5. Puesto que el gel de agarosa tiene poros, los fragmentos más pequeños de ADN migrarán hacia el ánodo (polo positivo) más rápidamente que los fragmentos de ADN que sean más largos.
6. Los fragmentos de ADN así separados se transfieren luego poradhesividad a una membrana de nylon. A este proceso se le conoce como “Southern blotting”.
7. La membrana de nylon contiene ahora covalente y los fragmentos de ADN firmemente adheridos en la misma posición en que migraron sobre el gel durante el proceso de electroforesis.
8. Esta membrana de nylon es expuesta a sondas marcadas de ADN, que son pequeños fragmentos sintéticos...