micro

 Universidad de Concepción
Facultad de Ciencias Biológicas
Departamento de Microbiología









UNIDAD PRÁCTICA N°1:
“INTRODUCCIÓN AL LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA”
















Introducción y objetivos:


Las bacterias son organismos unicelulares procariontes, esto quiere decir que estánformados por una sola célula carente de núcleo. Su ácido desoxirribonucleico (ADN) se encuentra libre en el citoplasma y no tienen organelos, como las mitocondrias, cloroplastos o aparato de Golgi. A pesar de su sencilla organización celular, cuentan con una pared celular (capa de polisacáridos) que envuelve la célula proporcionándole rigidez y protección. Son tan pequeñas que es imposible verlasa simple vista, solamente cuando llegan a agruparse formando colonias es cuando las podemos reconocer.
La Microbiología se puede definir, sobre la base de su etimología, como la ciencia que trata de los seres vivos muy pequeños, concretamente de aquellos cuyo tamaño se encuentra por debajo del poder resolutivo del ojo humano. Esto hace que el objeto de esta disciplina venga determinado por lametodología apropiada para poner en evidencia, y poder estudiar, a los microorganismos.
En el presente laboratorio introductorio se dará como inicio una pequeña reseña de las partes constitutivas de un microscopio, con énfasis en los métodos usados en bacteriología. Se darán a conocer los usos y características de los materiales e instrumentos que serán utilizados a lo largo de nuestro trabajoconcluyendo con una explicación sobre la asepsia que requiere el trabajo bacteriológico, para así evitar cualquier tipo de contagio y contaminación de los materiales y el operador.
En términos prácticos realizaremos la observación de bacterias en fresco, cuyo objetivo será el de determinar la movilidad celular (movimientos de traslación). Por otro lado con esta observación se pretende poder identificarde manera visible las formas, tamaños y características de cada colonia bacteriana de cada especie.
Por medio de la preparación de un frotis (delgada capa de bacterias distribuidas en la superficie de un portaobjetos y fijado a él) se realizaran diversos tipos de tinciones simples basadas en la acción de un solo colorante sobre la célula. También se realizarán tinciones diferenciales las quepermiten juntar las bacterias por su afinidad por los colorantes empleados en ellas agrupándose así en diferentes grupos (gram + y gram -). Por último la tinción especial, cuyas técnicas son más complejas, pero tienen por objetivo, destacar algunas partes constitutivas de la célula, como son los flagelos, las capsulas y las esporas.

Materiales:

Placas de Petri
Tubos de ensayo
Material de tinciónAgua, Alcohol, aceite de Cedro
Porta-objeto
Cubre-objeto
Asas de Platino
Pipetas graduadas, pipetas Pasteur
Metodología:

1.- Observación a fresco:
Se buscó una muestra una muestra de cultivos bacterianos puros luego se procedió a colocar la muestra en el porta-objeto si la es muestra se trató de un caldo se coloca una gota, si se trató de un cultivo en medio solido (agar-agar), se preparó una gota desuero fisiológico en el porta-objetos y dispersando en ella una asada de cultivo.
Se colocó un cubre objeto sobre la emulsión y se observó con el objetivo de 40x.

2.- Tinciones simples:
Se colocó una gota de cultivo líquido en un portaobjeto limpio o una gota de emulsión si se tuvo un cultivo medio solido luego se extendió el material cuidadosamente en una capa delgada. Se dejó secar atemperatura ambiente o calentando suavemente con el mechero para luego fijarlo con la llama del mechero evitando carbonizarlas por sobrecalentamiento.
Ya con el frotis listo para el teñido se cubrió con el colorante deseado y por el tiempo correspondiente. Luego se lavó con agua para eliminar el exceso de colorante, se secó la preparación y después se observó la preparación usando el objetivo de 100x....