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MICROBIOLOGIA APLICADA Manual de Laboratorio

PRACTICA Núm. 9 MEDIOS DE CULTIVO I. OBJETIVO Conocer la clasificación, preparación, esterilización y distribución de los medios de cultivo.

II. INTRODUCCION Un medio de cultivo es cualquier “medio” que proporcione substancias nutritivas que permitan el desarrollo y reproducción de microorganismos. Estos pueden ser líquidos, sólidos osemisólidos. (Apéndice A)

CLASIFICACION DE MEDIOS Los medios de cultivo pueden clasificarse en: Naturales. Están constituidos por substancias naturales, tales como papa, leche, huevos, sangre, etc. Artificiales. Están compuestos de substancias que son manipuladas por el hombre en el laboratorio. Estos a su vez se clasifican en: ♦ Sintético. Preparado exclusivamente con substancias de composición químicaconocida. ♦ No Sintético. Hecho con substancias de composición química y cuyos componentes no pueden analizarse.

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El medio más usado en bacteriología es el caldo simple, que no es más que una infusión de carne magra (sin grasa, tendones, aponeurosis, etc.). La carne puede ser de cualquier músculo incluyendo el corazón. En ocasiones y con elobjeto de que tenga más productos nutritivos, se le agregan infusiones de cerebro, hígado, etc., que contienen ciertos factores nutritivos en mayor cantidad. También son muy usados los caldos peptonados, en los cuales la carne o leche es sometida a hidrólisis ácida o enzimática, obteniéndose entonces péptidos y aún aminoácidos en diversas proporciones incrementando de esta manera estos componentesque son más fácilmente metabolizados. Los caldos nutritivos pueden solidificarse con diversos agentes capaces de ser convertibles de sol a gel y viceversa. Uno de los más usados es un polisacárido complejo inatacable por las bacterias, muy higroscópico y que es extraído de ciertas algas rojas que existen en el Océano Pacífico. Este producto se llama Agar. Una cantidad de 1.5 g agregados a 100 mL decaldo, es suficiente para convertirlo en una masa de consistencia gelatinosa, más bien dura. El agar para que sea disuelto necesita temperaturas de casi 100°C y al irse enfriando permanece en esta forma de sol hasta los 40°C. Por debajo de esta temperatura se transforma en una masa sólida (gel) que es estable así por tiempo indefinido. Medios Selectivos. Estos han sido modificados de algunamanera para inhibir el desarrollo de un grupo de organismos, mientras que permite el desarrollo de otro grupo proveniente de una flora mixta. La modificación puede consistir en la alteración del pH. También se puede incluir a un medio sólido substancias inhibidoras que dejen crecer ciertos tipos de bacterias pero no otras sensibles a tal agente, teniendo entonces un medio que puede ser moderadamente óaltamente selectivo, P. ej. S-110, S.S. y S.D.A. los cuales a la vez son diferenciales y selectivos. Medios Enriquecidos. Son aquellos a los que se les pueden agregar substancias para enriquecerlo, como p.ej. si es sólido y se le agrega sangre, se denomina agar sangre, el cual

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puede ser utilizado en el aislamiento de bacterias muy exigentesen sus requerimientos nutricionales. También se puede estudiar en este medio la acción de productos solubles bacterianos como las hemolisinas, en cuyo caso la colonia está rodeada de una aureola clara, donde estas enzimas han destruido los glóbulos rojos. Ejs. de medios enriquecidos: Medio de suero de Loeffler para bacilos diftéricos, Medio de Lowenstein-Jensen, para bacilos tuberculoso, CaldoSelenito Cisteína y Caldo Tetrationato. Medio Diferencial. Es aquel en el que se ha añadido una clase de indicador, generalmente un colorante, que permite diferenciar entre distintas reacciones químicas que se producen durante el crecimiento Ej. E.M.B. (Eosina-azul de Metileno) que se utiliza para el aislamiento de enterobacterias Gram negativas. La presencia del azul de metileno inhibe a las...