Microalga

“UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA”



OBSERVACIÓN DE BACTERIAS Y TINCIÓN SIMPLE



- Curso:
Laboratorio de microbiología


- Profesora:
Gretty Villena


- Integrantes:
• Miranda Miranda, Cindy Elena


• Núñez del Prado Rodríguez, Cinthya Susana

• Serrepe Huamaní,Analucía del Rosario











Ciclo: 2009-I


















INTRODUCCIÓN



La mayoría de los microorganismos carecen de coloración natural, dependiendo del interés de estudio tenemos dos métodos: preparación en fresco, si nuestra observación se basa en el movimiento bacteriano) y tinción simple, para la identificación de la morfología y tipo de agrupaciónbacteriana. Para realizar la tinción se somete a la muestra a un proceso de fijación mientras que el otro método no se realiza dicho proceso. Para ambos casos el uso del microscopio es indispensable.

En nuestra experiencia en el laboratorio hemos realizado tinción simple de bacterias mediante el uso un colorante permitiéndonos distinguir a la bacteria de su medio circundante. Este método fue necesariopara nuestra observación con el microscopio óptico convencional de campo claro. El valor de esta clase de tinción radica en su simplicidad y facilidad de empleo.

Los colorantes básicos (cristal violeta, azul de metileno y fucsina) son compuestos orgánicos y cada tipo de colorante tiene afinidad por determinados componentes celulares. Estos están cargados positivamente (catiónico) y secombinan fuertemente a moléculas cargados negativamente, como ácidos nucleicos y muchas proteínas. Como la célula bacteriana presenta una superficie cargada negativamente, estos colorantes se emplean a menudo para teñir a las bacterias ya que la diferencia de carga produce una afinidad por lo tanto la fijación del colorante en ellas.














MATERIALES

- Muestraconteniendo bacterias

- Asa de kolle

- Lamina porta objeto

- Mechero de alcohol

- Piseta con agua

- Laminas fijadas de microorganismos

- Aceite de inmersión

- Colorantes básicos: azul violeta, cristal violeta y carbol fucsina

- Papel secante

- Soporte para tinción



MÉTODOS:

• Antes de realizar trabajos con bacterias y manipularlasadecuadamente sin contaminación alguna, se utiliza el proceso de esterilización por calor. Calentamos todos los materiales con la llama del mechero así nos aseguramos que las bacterias en estudio no provoquen alguna infección.

• Fijación

El fin de la fijación es el de inmovilizar las células bacterianas, es decir; adherirlas al portaobjeto, esto se logra debido a que el protoplasma deestas se coagula, en especial las proteínas logrando que la forma de estas quede intacta sin dañarlas o alterarlas, ya que lo que se busca es poder observar con la mejor precisión posible a las células microbianas.
Es importante este paso pues después de la tinción realizamos los pasos de lavado y si la muestra no se encuentra bien fijada no podremos lograr nuestro objetivo pues la muestra seperderá.

Existes dos tipos de fijación:
• Método físico: Para bacterias procedentes de un medio sólido.
Fijación por calor consiste en eliminar los excesos de agua que presenta la muestra homogenizada. Debemos flamear (con el portaobjeto se atraviesa la llama del mechero) cuidadosamente evitando no excederse con este proceso para que las bacterias no se lisen o sin causar presencia deartefactos que alteran nuestras observaciones.








• Método químico: Para bacterias procedentes de un medio líquido.
Fijación con agentes químicos es utilizada debido a que las bacterias presentan capas de materia orgánica que tienen a despegarse con facilidad en los lavados posteriores. En cambio, con este tipo de fijación se tendrá una mejor visión de la forma de...