Microbilogía de alimentos

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
Laboratorio de Microbiología de Alimentos
Integrantes: Grupo:

Persona designada: Fecha:

PRACTICA Nº 2
1.) TEMA: Identificación y Aislamiento de Salmonella en Cárnicos

2.) OBJETIVOS:

* Detectar Salmonella spp. por una técnica validada y una técnica no validada convencional en carnemolida de mercados del distrito de Quito (sector Calderón).
* Comparar entre las dos tipos de técnicas para el aislamiento de salmonella.
* Conocer su morfología y metabolismo bioquímicos que permiten su identificación.

3.) FUNDAMENTO TEORICO:
SALMONELLA
El género Salmonella (S), agente etiológico de la salmonelosis, afecta a aves de corral, vacunos, porcinos y ovinos, entre otrasespecies. Estas bacterias, son los más frecuentes agentes causales de enfermedades transmitidas por alimentos (ETAs). Pertenece a la familia de las enterobacterias y constituye un grupo muy complejo de microorganismos patógenos para el hombre, pudiendo afectar a diversos animales. Comprende dos especies: Salmonella entérica dividida en seis sudespecies y salmonella bongori. Todas ellas se puedenidentificar por características fenotípicas fáciles de ver.
* Técnica validada: NORMA ISO
ISO 6579 Directiva general concerniente a los métodos de investigación de salmonella. Este método se basa en la investigación de salmonella en cuatro etapas sucesivas:
* Determinación Microbiológica. Mediante un método normalizado, ISO 6579 y modificaciones posteriores. Directiva general concerniente alos métodos de investigación de Salmonella. Este método se basa en la investigación de Salmonella en cuatro etapas sucesivas:
* Pre-enriquecimiento en medio no selectivo. Siembra de la muestra en agua de peptona tamponada e incubación a 37ºC durante 16-20 h.
* Enriquecimiento en medios selectivos líquidos. Con el cultivo del pre-enriquecimiento siembra en verde malaquita con clorurode magnesio e incubación a 42ºC 24 h. y en caldo selenito cistina e incubación a 37ºC 24 h. suplementarias.
* Aislamiento e identificación: A partir de los cultivos anteriores se siembran dos medios sólidos, agar rojo fenol verde brillante y otro medio selectivo a elección. Ambos se incuban a 37ºC 24 h y si es necesario 48 h.
* Confirmación. Resiembra de las presuntas colonias deSalmonella y confirmación en los medios de ensayos bioquímicos para lo cual se usan las pruebas de TSI, LIA y UREA.
* Técnica no validada: TESIS- Guissella Aguirre
Preparación de muestras: Se procedió a homogeneizar la muestra, para luego tomar en forma aséptica con espátulas estériles, trozos de diferentes zonas de la carne, hasta pesar 25 gramos de la misma.
Esquemas de aislamiento:Durante el presente trabajo se investigaron 30 esquemas de aislamiento a una temperatura de 35-37ºC, para salmonella typhi y 30 esquemas a 42-43ºC para Salmonella no typhi. Los esquemas de aislamiento se dividieron en varias etapas, las que se mencionan a continuación.
Preenrequecimiento en medio líquido no selectivo: Se procedió a colocar 25 gramos de muestra en 225 ml de caldo lactosado; se incubóde 18 a 24 horas a 35-37ºC.
Siembra directa en medios sólidos selectivos: Posteriormente de cada uno de los caldos de preenrequecimiento se procedió a realizar la siembra por estriamiento en superficie, en medios sólidos selectivos (por duplicado).el medio utilizado es agar bismuto sulfito seg. WILSON-BLAIR; se incubó durante 24-48horas a 37ºC y 43ºC.
Medio sólido diferenciales o de bajaselectividad: A las colonias de salmonella que crecieron en los medios sólidos de aislamiento selectivo se las sembró en un medio de baja selectividad. Se incubaron durante 24 horas a 37ºC. Estos medio es agar McConkey.
Pruebas bioquímicas: Se sembró a partir del cultivo bacteriano del medio diferencial de MacConkey agar a los medios bioquímicos. Se incubaron durante 24-48horas a37ºC. Las pruebas...