Microbiología

Título: Microbiología de carnes, frutas y especias
Objetivos:
A. Determinar el número aproximado de organismos presentes en una muestra de alimentos (carne molida y carne curada, pimienta molida) utilizando el método de contaje de placa estándar.
B. Aislar, mediante diversas condiciones de tiempo, temperatura y medios de cultivo, diversos grupos de microorganismos.
C. Determinar elmicroorganismo que contiene en la fruta (guineo).
Procedimiento:

I. Frutas

1. Humedezca un hisopo con agua estéril y páselo por la superficie de la fruta.
2. Inocule la placa de agar y realice un estriado para separación usando la aguja de inocular.
3. Incube por una semana a temperatura ambiente.
* Realizar descripción macroscópica de las colonias de la placa.
* Prepararmontaje húmedo con lactophenol cotton blue o azul de metileno en el caso de mohos filamentosos (a uno solamente).
* En caso de colonias cremosas, realizar tinción gram y observar.

II. Carnes

1. Pese 50 gramos de la muestra de carne y mezcle en la licuadora (o “Stomacher”) con 450 mL de agua peptona al 0.1% durante 1 minuto, a velocidad moderada. Esta se considera una dilución 1/10.2. Transfiera asépticamente 1mL de la mezcla a una botella de 99 mL de agua de peptona al 0.1%. Mezcle agitando la botella (asegurese que la tapa esta debidamente ajustada antes de comenzar a agitarla). Esta botella representa una dilución de 1/1000.
3. Prepara a una serie de diluciones de 1/10000 hasta 1/10000000.
4. Vierta el agar derretido en las placas y mezcle con cuidado en formacircular, para distribuir la muestra uniformado.
5. Incube las placas a 35°C por 48 horas. (Si desea contaje de psicrofilicos, las placas se colocan a temperatura de nevera 20°C de 3-4 dias.
6. Una vez terminado el periodo de incubación:
* Cuenta colonias (CFU-“Colony Forming Units”)
* Calcula la densidad total de bacterias (CFUx factor de dilución= # de bacterias/gm)
*Selecciona una o dos colonias diferentes de cualquiera de las placas y realiza una tinción gran. Anota tus observaciones a 100x (gram, morfología y arreglo)

A. Carne molida fresca

1. Prepare diluciones de 10-1 a 10-5. Ponga en placa (en duplicado) de TSA utilizando técnica de “spread plate”; alícuotas de 0.1 mL se pondrán en placas y se riega el liquido utilizando un “hockey stick”previamente esterilizado.
2. Del par duplicado una de las placas se incubaran a 25°C (temperatura ambiente) por 2 días y el otro grupo de placas de cada dilución se pondrán a 7°C por 7 días.

B. Carne molida almacenada

1. Prepare diluciones de 10-3 a 10-7. Siga las instrucciones antes mencionadas para poner en placa.

C. Carnes curadas o saladas

1. El procedimiento es similar aldescrito anterior con las siguientes variables.
* Se sustituye la carne molida por carne curada (jamon, tocineta, jamonilla o “hot dog”).
* Se sustituye al diluente por agua con peptona 0.1% +4% sal (NaCl).
* Se sustituye el agar por agar con 4% NaCl.
* Las diluciones para contaje son de 1/10 a 1/10000 )para detector halofilicos, se incuban durante 3-5 dias).
* La dilucióninicial es 50 g + 450 mL de agua de peptona salada (1/10) y luego diluir en 99 mL de agua de peptona salada (1/1000).

*Las observaciones son las mismas que en método anterior (paso #6 de la parte A)

III. Especias

1. Pese 1 g de la especia correspondiente a su lado de mesa y transfiera a una botella de 99 mL de agua de peptona 0.1%. Agite vigorosamente por 2 minutos y permita que laspartículas solidas se depositen en el fondo de la botella (10-2).
2. Sumerja la botella por completo en un baño de agua a 80°C por 10 minutos. Al cabo de 10 minutos enfríe la botella con agua de la pluma.
3. Prepare diluciones en serie hasta 10-5.
4. Vierta el agar derretido en las placas y mezcle con cuidado, en forma circular, para distribuir la muestra uniformemente. Luego que el agar se...