Microbiología

LABORATORIO MICROBIOLOGIA GENERAL Y PARASITOLOGIA.


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LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
LABORATORIO 9
RECUENTO E INVESTIGACION DE LA PRESENCIA DE ENTEROBACTERIAS EN
ALIMENTOS.

Las enterobacterias constituyen una familia de gran importancia desde el punto de vista
sanitario. Esta integrada por géneroscuyas especies son huéspedes habituales del intestino del
hombre y animales, siendo con frecuencia contaminantes alimenticios de origen fecal.
Otras especies son patógenas, responsables de toxiinfecciones.
La familia Enterobacteriaceae esta integrada por bacilos y cocobacilos, Gram
negativos, generalmente móviles por flagelos perítricos, a veces inmóviles, no esporulados,
comensales,saprofíticos, o patógenos intestinales, aerobios y anaerobios facultativos. Como
norma general fermentan la glucosa con formación de gas en la mayoría de los casos, reducen
los nitratos a nitritos.
De los integrantes de esta familia, unos fermentan la lactosa y otros no. Incluye los
siguientes géneros:

No fermentadores de la lactosa
Salmonella
Shigella
Edwarsiella
Hafnia
Proteus
ProvidenciaYersinia
Morganella
Erwinia (fermenta excepcionalmente)

Fermentadores de la lactosa
Escherichia
Enterobacter
Citrobacter
Serratia (a veces)
Klebsiella

La familia Enterobacteriaceae incluye también al grupo coliforme, al coliforme fecal, a
Escherichia coli considerada como indicador fecal y a Escherichia coli enteropatógeno (ECE)
para el hombre.
En microbiología de alimentos sedenominan “coliformes” a las enterobacterias que
fermentan la lactosa y no son necesariamente enteropatógenas. Incluyen a los géneros
Escherichia, Citrobacter, Klebsiella y Serratia.

LABORATORIO MICROBIOLOGIA GENERAL Y PARASITOLOGIA.
NUTRICION Y DIETETICA. II SEMESTRE.
PROF. MARIA ELISA ESCOBAR PEÑA.

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_________________________________________________________________________________Materiales.
Pipetas estériles de 1 ml estériles
Asa de cultivo
Placas de Petri estériles
Estufa de cultivo
Medios de cultivos y reactivos.
Medio Agar-dextrosa-cristal violeta-rojo neutro en g/l. (VRBG)
Extracto de levadura
Peptona
Cloruro de sodio
Sales biliares
Lactosa
Dextrosa
Rojo neutro
Cristal violeta
Agar
Agua destilada

3
7
5
1,5
10
10
0,03
0,002
15
1000

Mezclar.Llevar a ebullición para disolver los ingredientes. Ajustar el pH a 7.3. Enfriar
rápidamente a la llave hasta temperatura de 47°C. Distribuir a razón de 15 ml para preparación
de placas de Petri. NO DEBE USARSE AUTOCLAVE PARA LA ESTERILIZACIÓN por
se un medio sensible al calor.
Otros medios de cultivos a considerar que se encuentran preparados:
Medio TSI (Agar tres azúcares)
Medio LIA (AgarLisina Hierro)
Caldo Nitrato-Nitrito
Pruebas IMVIC:
 Indol
 Agar citrato de Simmons
 Rojo Metilo
 Voges-Proskauer
Reactivos para las pruebas de RM/VP
Reactivo de Kovacs
Reactivos para lectura de reducción de nitratos

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NUTRICION Y DIETETICA. II SEMESTRE.
PROF. MARIA ELISA ESCOBAR PEÑA.

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Procedimiento.
a) Preparar la muestra y diluciones según procedimiento ya realizado en prácticos
anteriores.
b) Sembrar en duplicado en placas petri 1 mL de las diluciones 10-1, 10-2 o mayores.
c) Verter en cada placa 15 mL de agar VRBG previamente fundido y temperado a 4445°C. (También se puede usar técnica de extensión, utilizando inoculo de 0,1ml de
las diluciones correspondientes)
d) Una vez solidificado el agar con el inóculo añadir una segunda capa con 4 a 5 mL del
mismo agar.
e) Incubar la placas invertidas a 35ºC durante 24 horas.
f) Elegir las placas que presenten entre 15 y 150 colonias. Si sólo se dispone de placas con
menos de 20 colonias, utilizar dichas placas. Contar aquellas de color púrpura.
g) Registrar como...