Microbiologa

ESPECTROMETRIA DE MASAS
TIPOS DE IONIZACION, MARCADORES ISOTOPICOS Y ANALISIS ELEMENTAL


1. TIPOS DE INONIZACION

2.1. IONIZACION FASE GASEOSA

2.2.1. Ionización por impacto electrónico (EI)

La Ionización por impacto electrónico es la técnica más común de ionización en espectrometría de masas. Es un método agresivo, ya que se suministra gran cantidad de energía alas moléculas que se quieren ionizar (por convenio se suministra 70 eV). Se producen así un gran número de fragmentaciones, además del ión molecular. Dichos fragmentos originan lo que se denomina como patrón de fragmentación. Dicho patrón se puede observar en el espectro de masas, que es una gráfica en la que se representa en el eje de abscisas la relación masa/carga, y en el eje de ordenadas laabundancia relativa del ion. El espectro de masas suministra información estructural de la molécula, además de ser como su huella digital.

2.2.2. Ionización química (CI + / CI-)

Es una técnica de ionización blanda que se utiliza cuando la técnica de impacto electrónico no proporciona suficiente información, cosa que ocurre cuando no se consiguen iones moleculares o el número de estossea escaso. En la técnica de ionización química se potencia la formación del  ion molecular, proporcionando un pico M+ muy intenso y muy poca fragmentación.

La ionización química ocurre cuando reaccionan las moléculas neutras del analito con los iones procedentes de un gas reactivo como metano, amoniaco, isobutano, etc. Este proceso tiene lugar a altas presiones, condiciones en las que lasmoléculas neutras del gas reactivo colisionarán repetidas veces con las excitadas, dando lugar a diferentes tipos de reacciones ion-molécula. Esto da lugar a la formación de iones secundarios estables, como M+H y R-H. Este tipo de ionización es más suave que el IE, y se usa cuando en el espectro de IE no aparece el ion molecular o para aumentar la intensidad de algunos iones.

2.2. IONIZACIONY DESORCION

2.3.3. Desorción de campo (FI)

Su mecanismo es semejante al de la ionización por campo, aunque difieren en que en la desorción no se necesita la volatilización  previa de la muestra. Este método se utiliza para compuestos no volátiles y térmicamente inestables, por ejemplo azúcares, fármacos, nucleótidos, etc.

2.3.4. Ionización de campo (FD)

Se aplicauna diferencia de potencial entre un electrodo plano y otro en forma de aguja, situados relativamente cerca el uno del otro. Se crea un campo eléctrico muy intenso en la punta de la aguja, de tal forma que si una molécula de muestra se aproxima  a la punta de la misma se puede producir fácilmente la pérdida o captura de un electrón. La muestra se introduce y se evapora por calefacción en elinterior de la fuente.

2.3. BOMBARDEO DE PARTICULAS

2.4.5. Espectrometría de ion Másico secundario (SIMS)

Técnica espectrométrica de masa que se usa para el análisis químico microscópico. Un rayo de iones primarios con una energía de 5-20 kiloelectrovoltios (keV) bombardea un pequeño punto de la superficie de la muestra bajo condiciones de vacío ultra alto. Los ionessecundarios positivos y negativos lanzados desde la superficie se analizan en un espectrómetro de masa respecto a su relación masa/carga. Se puede generar una imagen digital de los rayos secundarios y puede medirse su intensidad. La imagen iónica puede relacionarse con las imágenes de la luz u otras imagenes microscópicas, proporcionando instrumentos útiles para estudios moleculares y de acciónfarmacológica.

2.4.6. Bombardeo de átomos rápidos (FAB)

El método FAB consiste en bombardear la superficie de un líquido con un haz de átomos acelerados, generalmente de xenon o de cesio, a 15 Kv. La muestra se disuelve en una matriz que posea un alto punto de ebullición para que así la presión de vapor sea baja. Normalmente se utiliza glicerol, tioglicerol, 3-nitrobencilalcohol. La...