Microbiologia ambiental

Taller Microbiología Ambiental 1.
Ciclo del carbono
Jennifer Díaz

1. Cálculos necesarios para preparar 20 cajas de medio de cultivo.
A cada uno de los medios:
20 cajas x 20ml = 400ml
Agar Tributirina.
Agar Xilano.
Agar Pectina citrica.
Agar Guayacol al 1%.
Se les agrego los siguientes suplementos.

Suplementos del cultivo:
* Levadura de panadería 0.5% = 50g

5g1000ml
X 400ml X= 2g.

* Fosfato monobásico de potación 0.4g/L

0.4g 1000ml
X 400ml X= 0.16g.

* Sulfato de manganeso 100mg/L

0.1g 1000ml
X 400ml X= 0.004g.

* Cloruro de calcio 0.3g/L

0.3 g 1000ml
X 400ml X= 0.12g.

* Agar 2%
20g 1000ml
X 400ml X= 8g.

2. El pH del agar será ajustado con HCL 0.5N prepare 50ml dees acido para ajustar el pH.

N=n. de equivalenteL

n.de equivalentes=N ×L

n.de equivalentes=0.5N ×0.05L=0.025 equivalente g.

0.025 equivalente g. × 1 mol1 equivalente g. × 36g.1 mol=0.9g.
3. Resultados de los recuentos.
Tabla 1. Recuentos de microorganismos.
Colonias | UFC dilución 10-5 la muestra se sembró por quintuplicado | UFC/g | Siembra |
Agar tributirina | 12, 18, 14,17 y 14 | 15 X 105 | Profundidad |
Agar xilano | 1, 34, 35, 89, 37 | 35 X 105 | Profundidad |
Agar pectina | 90, 87, 85,12 y 89 | 88 X 106 | Superficie |
Agar lignina | 9, 7, 4, 45 y 6 | 6,5 X 106 | Superficie |

4. De todas las colonias se seleccionaron 2 de cada grupo funcional por tener los halos de hidrólisis mas grandes estas 8 cepas se enfrentaron por Gauze, se sembraron en unaconcentración de 1 X 106 UFC /ml se deben elegir colonias que no tengan halos superiores a 5mm.

Consorcios

Tabla 2. Consorcios de cepas con el menor efecto antagónico (se tuvieron en cuenta las cepas que presentaran halos menores a 5mm)

Cepa | consorcios | | Cepa | Consorcios | | Cepa | consorcios |
1 lip | 2 lip | | 4 xila | 2 lip | | 7 lac | 2lip |
| 4 xil | | | 5 pec || | 4 xil |
| 5 pec | | | 7 lac | | | 5 pec |
| 7 lac | | 5 pec | 2 lip | | | 8 lac |
2 lip | 3 xil | | | 4 xil | | 8 lac | 2 lip |
| 4 xil | | | 7 lac | | | 4 xil |
| 5 pec | | | 8 lac | | | 5 pec |
| 7lac | | 6 pec | 2 lip | | | 7 lac |
3 xil | 2 lip | | | 4 xil | | | |
| 4 xil | | | 5 pec | | | |
| 5 pec | | | 7 lac | | | |
| 7lac | | | 8 lac | | | |

5. Cada cepa se cultivo en caldos inductores para cuantificar la actividad enzimática de estas se seleccionaron la cepas con mayor expresión enzimática y menor efecto antagónico.

Actividad enzimática de las cepas 1 y 2 lipoliticas 1UL = umol/ L de p-nitrofenol
1 lipo = 0,789
X=Y-0,0450,123=0,789-0,0450,123=6,049 µmo/L de p-nitrofenol=6,049 UL
2 lipo =0,456
X=Y-0,0450,123=0,456-0,0450,123=3,341 µmo/L de p-nitrofenol=3,341 UL

Actividad enzimática de las cepas 3 y 4 xilanoliticas UX= umol/L de xilosa
3 xila = 0,789
X=Y-0,00980,201=0,789-0,00950,201=3,878 g/L de xilosa

3,878g xilosaL × 1 mol150,13g xilosa ×106μmol1mol=25830,9 μmol/L de xilosa=UX

4 xila = 0,712
X=Y-0,00980,201=0,712-0,00950,201=3,495 g/L de xilosa
3,495g xilosaL × 1mol150,13g xilosa ×106μmol1mol=23279,8 μmol/L de xilosa=UX
Actividad enzimática de las cepas 5 y 6 pectinoliticas UQ = umol/L de ácido galacturonico metilado
5 pec = 0,231
X=Y-0,0560,145=0,231-0,0560,145=1,207 mmol/L de ácido galacturonico metilado=0,00121 UQ
6 pec = 0, 456

X=Y-0,0560,145=0,456-0,0560,145=2,759 mmol/L de ácido galacturonico metilado=0,00276 UQ

Actividad enzimática de lascepas 7 y 8 Lacasas
7 lac = 0,876 dil1/3

X=(Abs/3min ×29300 ×0,7))×1×106 ×inv Fd
X=(0,876/3min ×29300 ×0,7))×1×106 ×3/1=42,71 ULac
8 lac = 0,781 dil ½
X=(0,781/3min ×29300 ×0,7))×1×106 ×2/1=8,462 ULac

Tabla 3. Actividad enzimática de cada cepa.
Cepa | Actividad enzimática |
1 lipo | 6,049 UL |
2 lipo | 3,341 UL |
3 xila | 25830,9 UX |
4 xila | 23279,8 UX |
5 pec |...