Microbiologia

ELISA
La técnica ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) se basa en la detección de un antígeno inmovilizado sobre una fase sólida mediante anticuerpos que directa o indirectamente producen una reacción cuyo producto, por ejemplo un colorante, puede ser medido espectofotométricamente. Este principio tiene muchas de las propiedades de un inmunoensayo ideal: es versátil, robusto, simple en surealización, emplea reactivos económicos y consigue, mediante el uso de la fase sólida, de una separación fácil entre la fracción retenida y la fracción libre.

Definición

Es una serie de pruebas sanguíneas utilizadas en el diagnóstico de la infección crónica por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). El ELISA para VIH es una prueba de detección para el diagnóstico de la infección porVIH. Si esta prueba es positiva, se debe confirmar con una segunda prueba llamada inmunoblot, que es más específica, y con la cual se corrobora si una persona verdaderamente es VIH positiva, ya que hay otras afecciones que pueden arrojar resultados falsos positivos en un ELISA, como el lupus, la enfermedad de Lyme y la sífilis.

Forma en que se realiza el examen

La sangre se extrae de unavena, usualmente de la parte interior del codo o del dorso de la mano. El sitio de punción se limpia con un antiséptico y luego se coloca una banda elástica alrededor del antebrazo con el fin de ejercer presión y hacer que las venas se llenen de sangre.

Luego, se introduce una aguja en la vena y se recoge la sangre en un frasco hermético o en una jeringa. Durante el procedimiento, se retira labanda para restablecer la circulación y, una vez que se ha recogido la sangre, se retira la aguja y se cubre el sitio de punción para detener cualquier sangrado.

En los bebés o niños pequeños, el área se limpia con un antiséptico y se punza con una aguja o lanceta puntiaguda. La sangre se puede recoger en una pipeta (tubo pequeño de vidrio), en una lámina de vidrio, sobre una tirilla de examen oen un recipiente pequeño. Finalmente, se puede aplicar un algodón o un vendaje en el sitio de la punción si hay algún sangrado.

TÉCNICAS DE INMUNOFLUORESCENCIA
Las pruebas de inmunofluorescencia (IF) se basan en que, cualquier antígeno, puede ser marcado específicamente con un fluorocromo coloreado, a través de un anticuerpo (Ac) específico. Cuando se irradia este elemento con luz ultravioletao azul se hace fluorescente. Dos de los métodos utilizados son:
Método directo
En este método se utiliza antisuero marcado para cada sustancia que se investigue (bacteriano, vírico o proteico); así, cuando el suero antisalmonela fluorescente se aplica a una extensión, procedente de un cultivo que contenga microorganismos del género Salmonella, reacciona con el antígeno homólogo, demostrándoseuna reacción específica antígeno!anticuerpo por fluorescencia de las bacterias revestidas con el anticuerpo.
Método indirecto
El antisuero (por ejemplo el de antisalmonela preparado en conejo) no se marca, sino que se emplea conjugado con suero antiglobulina fluorescente, a través de una técnica en dos tiempos. La extensión con la bacteria en cuestión se “inunda” con el suero conejoantibacteriano. Después de 10-30 minutos, el suero que no haya reaccionado se elimina mediante lavado, tratándose a continuación con globulina anticonejo fluorescente. Las células bacterianas que hayan reaccionado con el antisuero, estarán revestidas con el anticuerpo (globulina) de conejo, y en consecuencia, reaccionarán con la globulina anticonejo marcada, de tal manera que se pueden identificar por lafluorescencia.
Cuando es preciso detectar el antígeno, la elección entre estos métodos, están en parte determinada por el número de microorganismos diferentes, que hayan de ser identificados en la muestra, por ejemplo, los corpúsculos rábicos cerebrales sólo tienen un antígeno, y en consecuencia, se debe emplear el método directo. Los virus respiratorios de las secreciones tienen muchos antígenos,...