Microbiologia

1-2 Test®
INSTRUCCIONES DE USO
Método Oficial AOAC 989.13

PRUEBA RÁPIDA PARA DETECCIÓN DE SALMONELLA

El 1-2 Test® de BioControl es un método rápido cualitativo para la detección de Salmonella. Los resultados se logran 3 días antes en comparación con el método tradicional. 1-2 Test es un método oficial aprobado por AOAC (Association of Official Analytical Chemists) International parautilización en todos los tipos de alimentos. Principio: El principio de 1-2 Test tiene base en la observación de la inmovilización de la Salmonella por anticuerpos polivalentes H (flagelar) en el medio de movilidad, con la formación de una banda visual definida (Inmunobanda). La prueba tiene dos compartimientos (figura al lado). La muestra pre-enriquecida es inoculada en la cámara menor. La cámaramayor contiene un medio gel de movilidad no selectivo, base de peptona. La cámara de movilidad se cierra con una tapa con una punta para formar el menisco en el gel, para la adición de la solución de anticuerpos. La comunicación entre las cámaras está cerrada con un plug, que debe ser retirado y descartado antes de la adición de la muestra. La Salmonella presente en el caldo tetrationato-verdebrillante se mueve de la cámara de inoculación hacia dentro del gel de movilidad para reaccionar con los anticuerpos, y formar la inmunobanda. Almacenamiento: Mantener el 1-2 Test® refrigerado, (temperatura entre 4-8 ºC). No congelar. No utilice 1-2 Test que hayan sido congelados.

ENRIQUECIMIENTO DE LAS MUESTRAS: Los procedimientos pueden cambiar, según el producto a analizar. Seguir el ManualAnalítico de Bacteriología (BAM - Bacteriological Analytical Manual) publicado por la AOAC International.

PREPARACIÓN E INOCULACIÓN DEL 1-2 Test

Cada paso de la preparación puede realizarse para una muestra individualmente o para múltiples pruebas. Utilice la bandeja, que viene con el kit, como soporte para realizar la prueba y también para incubar los kits. La identificación de la muestra en el kitpuede ser: 1) en la cámara de movilidad, siempre que no interfiera en la lectura de los resultados, o 2) sobre la superficie plana de la tapa blanca.

1

1. Adicionar la Solución de Yodo-yoduro

2. Sacar el plug que cierra la cámara de inoculación

3. Inoculación

4. Cortar la punta en la tapa blanca

5. Agregar 1 gota de Anticuerpos

a) Para todos los alimentos con excepción decarne cruda o alimentos altamente contaminados, colocar el 1-2 Test con la tapa negra para arriba y sacar la tapa. Adicionar 1 gota del Reactivo 1 (yodo-yoduro) en la cámara de inoculación. Colocar la tapa y agitar para mezclar (Figura 1). NOTA: Este paso no se realiza para carnes crudas y productos con alta contaminación porque en este caso, la incubación del caldo tetrationato se lleva a cabo enun tubo de ensayo por separado. c) Antes de la inoculación del kit, homogeneizar el caldo de preenriquecimiento. Utilice una pipeta o punta de pipeta estéril para transferir 0,1 ml de la muestra enriquecida a la cámara de inoculación. NOTA: Para carnes crudas y productos con alta contaminación: transferir 1,5 ml del caldo tetrationato incubado a 42 °C a la cámara de inoculación vacía (Figura 3).b) Colocar el 1-2 Test con la tapa negra para arriba y sacar la tapa. Sacar el plug de la cámara de inoculación con una pinza estéril, descartar el plug (Figura 2). Si no se saca el plug, la bacteria no es capaz de moverse desde la cámara de inoculación hasta la cámara de movilidad. e) Adicionar 1 gota del Reactivo 2 (Anticuerpos) en el espacio formado por la tapa blanca en la cámara demovilidad. Volver a colocar la tapa blanca (Figura 5). Una gota del Reactivo 2 debe llenar 2/3 del espacio vacío del gel. Esto se verifica observando el color azul de la solución de anticuerpos en el pocillo formado por la punta que se cortó de la tapa blanca.

d) Colocar el 1-2 Test con la tapa blanca hacia arriba, sacar la tapa. Cortar la punta de la tapa con unas tijeras estériles y descartar la...