microbiologia


LABORATORIO No 5. Aislamiento y selección de microorganismos productores de proteasas Pontificia Universidad Javeriana
LABORATORIO No 4. Aislamiento y selección de microorganismos productores de amilasas
Pontificia Universidad Javeriana
María Alejandra Flórez
Natalia Gómez Oviedo
Silvana Fiorella Gómez Sánchez
Pontificia Universidad Javeriana
Laboratorio de Bioquímica Básica21de marzo de 2013

LABORATORIO No 4. Aislamiento y selección de microorganismos productores de amilasas
Pontificia Universidad Javeriana

Objetivos:
Aislar y seleccionar microorganismos mesófilos productores de enzimas amilolíticas a partir de muestras de suelo o agua.
Aislar y seleccionar microorganismos mesófilos productores de enzimas proteoliticas a partir de muestras de suelo o agua.Introducción:







Resultados:
Medio
evaluado

Colonias de interés
Diámetro de los halos de hidrólisis en las colonias más representativas
Almidón
Colonias
Se presentó una hidrolisis indeterminada puesto que no es viable la medición del halo como se puede observar el la figura 1 en la que el lugol no tiño en su totalidad el agar almidón
Tabla 1. Halos de hidrólisis sobresustrato específico


Figura 1.Hidrolisis en agar almidón







Medio
evaluado

Colonias de interés
Diámetro de los halos de hidrólisis en las colonias más representativas
Leche
Colonias
Se presentó una hidrolisis indeterminada puesto que no es viable la medición del halo en el agar leche
Tabla 2. Halos de hidrólisis sobre sustrato específico




Discusión:
Lascélulas de los microorganismos al igual que las de todos los seres vivos, por medio de su metabolismo incorporan y transforman los diferentes compuestos obtenidos del medio ambiente en compuestos requeridos para su crecimiento y reproducción. En estas transformaciones participan diferentes enzimas que catalizan las reacciones de oxidación, reducción, hidrólisis, transferencia de grupos,isomerización y síntesis; degradando los compuestos incorporados y sintetizando nuevos compuestos a partir de estos. (Alarcón, LB et al)

Pruebas cualitativas de actividad enzimática

Hidrólisis de almidón
El almidón es un hidrato de carbono de alto peso molecular cuya estructura básica es una mezcla de dos moléculas de polisacárido poliglucosa: amilosa lineal (10-20%) y amilopectina ramificada(80-90%) (Holum, JR).La hidrólisis enzimática se lleva a cabo en los enlaces α-1,4 acetal y α-1,6 acetal que mantienen unido el polímero de almidón (Stanier,RY et al). La enzima α-amilasa se encarga de catalizar la hidrólisis de los enlaces α-1,4 glucosídicos del almidón (Blazevic, DJ et al), atacando el interior de las cadenas de polisacárido, ya sea amilosa o amilopectina, en puntos al azar paraformar una mezcla de fragmentos de 5 a 9 unidades de la configuración α (Nussenbaum, S).

(C6H10O5)n amilosa + amilopectina


Figura 1: Reacción de hidrólisis de almidón.

En la presente práctica se evidenció la presencia de enzimas amilolíticas en microorganismos provenientes de muestra de suelo a partir de una prueba cualitativa en agar almidón sembrado en superficie con elmicroorganismo problema.
Este medio permitió evidenciar la presencia de enzimas amilolíticas a partir de la reacción de hidrólisis de almidón, la cual se reveló con lugol, observándose la formación de un halo transparente alrededor de las colonias; que reportó una hidrólisis indeterminada ya que no se pudo medir exactamente el diámetro del halo alrededor de cada colonia.
La formación de este halotransparente alrededor de las colonias al revelar con lugol, se debe a que el yodo forma un compuesto de inclusión dentro de la hélice no ramificada de unidades de glucosa de la cadena de amilosa formando un compuesto de color azul, el cual se decolora si ocurre desintegración de esta red por hidrólisis de almidón (Holum, JR et al).








Figura 2: Hélice de las moléculas de yodo encerradas...