microbiologia

METODOS EMPLEADOS EN LA OBSERVACION DE BACTERIAS
La observación de bacterias con microscopía óptica, en un laboratorio de Microbiología, puede realizarse por diferentes procedimientos como son la observación directa de microorganismos “in vivo” o el tratamiento con colorantes mediante tinción positiva y negativa, procesos dirigidos a incrementar el contraste y por consiguiente a optimizar elresultado. Se describen aquí los métodos y las técnicas más habituales para la observación de muestras con microscopía óptica, así como procedimientos de observación con microscopía de fluorescencia y confocal con diferentes tipos de fluorocromos y sondas moleculares.
OBSERVACIÓN “IN VIVO”
Método de la gota pendiente
Este procedimiento es la forma más sencilla de observación de organismos vivos,nos proporciona información sobre la morfología, tamaño, color y movilidad de las bacterias. Sin embargo, debido a la falta de contraste con el entorno es una práctica que se utiliza únicamente para la observación del movimiento.
Esta técnica permite observar el desplazamiento rápido y rectilíneo o dando giros y volteretas en aquellas bacterias que tienen flagelos (Video complementario). Lasbacterias inmóviles presentan un movimiento vibratorio denominado movimiento browniano, debido al choque de las moléculas en una solución líquida


Método de observación directa en contraste de fases o interferencia diferencial
En este caso la suspensión de microorganismos se observa con un microscopio de contraste de fases o interferencia diferencial (DIC) que permiten el aumento del contraste.El microscopio de contraste de fases utiliza un condensador con un diafragma anular opaco con un anillo transparente que provocan variación de la longitud de onda dependientes de la densidad y el índice de refracción de la muestra, se observan las células más brillantes sobre un fondo oscuro.El microscopio de interferencia diferencial permite la observación tridimensional de la muestra por laincorporación de prismas que generan haces de luz polarizada que se cruzan, incrementando las diferencias entre los componentes celulares por lo que es muy útil para la observación de esporas, inclusiones, filamentos septados o vainas entre otros
TINCIONES
Tinción negativa
No se trata de una tinción propiamente dicha ya que no se utilizan colorantes con cromóforos, ni se lleva a cabo ningunareacción entre estructuras celulares y los colorantes. En este caso el frotis se hace con una gota de una solución de nigrosina o tinta china, ambos son productos particulados, insolubles, que formarán una película opaca a la luz. En este tipo de tinción se prescinde de la fijación por calor, se deja secar la preparación y se observan los microorganismos brillantes sobre un fondo oscuro


Tinciónsimple
La mayoría de los colorantes utilizados en las tinciones positivas son colorantes derivados de las anilinas, sales orgánicas intensamente pigmentadas que proceden del alquitrán.
Se denominan colorantes básicos si el cromóforo (porción coloreada) de la molécula está cargada positivamente, por ejemplo, cristal violeta (Fig. 5) y azul de metileno son colorantes básicos. Otros colorantes de estacategoría utilizados con frecuencia en bacteriología son safranina, fuchina básica y verde malaquita. Bajo condiciones normales de crecimiento, la mayor parte de los procariotas tienen un pH interno próximo a la neutralidad (pH 7.0) y una superficie celular cargada negativamente, así los colorantes básicos son los más eficaces. Colorantes ácidos con rojo Congo, rosa de bengala, eosina y fuchinaácida tiene un cromóforo cargado negativamente y son utilizados para teñir positivamente ciertos componentes como las proteínas.
TINCIÓN DIFERENCIAL
Las tinciones diferenciales se utilizan ampliamente en microbiología; consisten en la aplicación de dos colorantes que contrastan en su intensidad o color y un paso intermedio que provoca una respuesta diferente entre microorganismos distintos o...