Microbiologia

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Cengiarotti Timothy Date séance : 05/03/2012
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Rocabado Victor Hugo Date de rédaction : 13/03/2012
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2ème Environnement - AIBT
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Lot : N°157 et N°963LABORATOIRE  N° 1: MICROBIOLOGIE APPLICATIONS
MISE EN EVIDENCE DES GERMES TOTAUX


1. INTRODUCTION
L’objectif du travail pratique est analyser deux échantillons d’eau (de provenance inconnue) fournis par le professeur (échantillon N°157 et échantillon N°957). Afin de pouvoir déterminer quelle quantité de germes totaux elles contiennent et la provenance de ces échantillons. Pour cela, nous allonsfaire deux manipulations différentes. La première sera une simple dilution successive et la deuxième consistera à une numération par ensemencement dans la masse.

2. MODE OPERATOIRE

3.1. Dilution successive des échantillons
3.2.1. Equipement du laboratoire utilisé pour la dilution

* 20 tubes à essais stériles
* 20 pipettes jetables stériles de 1mL
* Becbunsen
* Portoir
* Vortex
* Pot blanc (poubelle)
* Aspire pipette

3.2.2. Réactif utilisé pour la dilution
* 2 échantillons d’eau (N° su lot : 157 et 963)
* 90mL de Ringer (liquide physiologique)

3.2.3. Protocole pour la dilution décimale
Réaliser le protocole pour les deux échantillons. Donc les échantillons d’eau à analyser contiennent plusieursmilliers de germes par mL. Afin de les dénombrer, on réalise à l’aide d’une solution de Ringer une série de 10 dilutions décimales : 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 10-8, 10-9, 10-10, pour chaque échantillon.
Par mesure de précaution et éviter tout contamination, à chaque opération, il faut changer de pipettes à chaque prélavage. Nous allons utiliser donc au total 20 pipettes jetablesstériles de 1mL (10 pipettes pour chaque échantillon) car nous passons d’un milieu plus concentré à moins concentré.
Nous effectuerons les 10 dilutions de la manière suivante (voir schéma 1) :
* Prélève 1mL de l’eau de l’échantillon et le mettre dans un tube stérile contenant 9mL de Ringer (= solution -1)
* Prélever 1mL de la solution -1 et le mettre dans un tube stérile contenant 9mL deRinger (= solution -2)
* Prélever 1mL de la solution -2 et le mettre dans un tube stérile contenant 9mL de Ringer (= solution -3)
* Prélever 1mL de la solution -3 et le mettre dans un tube stérile contenant 9mL de Ringer (= solution -4)
* Prélever 1mL de la solution -4 et le mettre dans un tube stérile contenant 9mL de Ringer (= solution -5)
* Prélever 1mL de la solution -5 et lemettre dans un tube stérile contenant 9mL de Ringer (= solution -6)
* Prélever 1mL de la solution -6 et le mettre dans un tube stérile contenant 9mL de Ringer (= solution -7)
* Prélever 1mL de la solution -7 et le mettre dans un tube stérile contenant 9mL de Ringer (= solution -8)
* Prélever 1mL de la solution -8 et le mettre dans un tube stérile contenant 9mL de Ringer (= solution -9)* Prélever 1mL de la solution -9 et le mettre dans un tube stérile contenant 9mL de Ringer (= solution -10)

Schéma 1 : Principe de dilutions successives(1)

3.2. Numération par ensemencement dans la masse
3.3.4. Equipement du laboratoire utilisé pour l’ensemencement en masse
* 22 boites de Pétri stériles
* Pipettes stériles jetables
* Etuve à 22°C
* Becbunsen

3.3.5. Réactif utilisé pour l’ensemencement en masse :
* 1mL de chaque échantillon
* 500mL de PCA (Plate Count Agar). Date de préparation : 05/03/2012.
* Les 10 dilutions décimales de chaque échantillon

3.3.6. Protocole pour l’ensemencement en masse :
Prend les 22 boites de Pétri stériles sur lesquelles nous prendrons soin de noter la dilution, nos...