microbiologia

Práctica Nro. 5
OBSERVACIÓN DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS
I.- GENERALIDADES:
Las bacterias son organismos procariotas, que miden uno o varios micrómetros, las podemos diferencias en dos grandes grupos: Las bacterias Gram positivas y bacterias Gram negativas. En términos generales, las capas que rodean a la célula bacteriana, se conoce como envoltura celular o pared celular. Laestructura y organización de ésta difieren en las bacterias Gram positivas y Gram negativas. El componente químico común en ambas es el péptidoglucano o mureína, que es el responsable de la forma y consistencia de la pared celular. La cantidad de péptidoglucano de la pared de las células bacterianas varía desde el 90% en la pared de algunas bacterias Gram-positivas hasta menos del 10% en lasbacterias Gram-negativas. La pared celular de las bacterias Gram-positivas contiene pequeñas cantidades de proteínas y polisacáridos, a menudo también ácidos teicoicos (polímeros de ribitolfosfato o glicerol-fosfato unidos mediante enlaces fosfodiéster) o de ácidos teicurónicos. Estos ácidos están unidos al péptido-glucano por los fosfatos. En las proteobacterias, Gram-negativas, la capa interna de lapared celular es pobre en péptidoglucano y la capa externa rica en lipoproteínas y lipopolisacáridos, los cuales constituyen más del 80% del peso seco de la pared. El espacio entre la membrana externa y la capa de péptidoglucano, llamado periplásmico, contiene un gran número de proteínas enzimáticas (Carrillo, 2005).
A través de la coloración de Gram, podemos diferencias ambos grupos bacteriano;el fundamento radica en la diferente estructura de la pared celular de ambos grupos: las bacterias Gram postivas tienen una gruesa capa de peptidoglicano en su pared, mientras que las bacterias Gram- tienen una capa de peptidoglicano más fina y una capa lipopolisacarídica externa. Tras la tinción con el primer colorante (Cristal violeta) se efectúa un lavado con etanol que arrastrará al colorantesólo en las Gram negativas, mientras que en las Gram postivas el colorante queda retenido y las células permanecerán azules. Las células Gram negativas se teñirán después con un colorante de contraste (safranina) para que puedan observarse. (Jawest, 2005).
Objetivos
Al finalizar la práctica el alumno será capaz de:
Manipular adecuadamente la tinción diferencial de Gram
Diferenciar frente almicroscopio las bacterias Gram postivas y Gram negativas
II. MATERIALES
2.1 Material biológico:
Cultivo purificado de Escherichia y Bacillus
Yogurt natural

2.2 Material de vidrio:
Láminas porta objeto
Láminas cubre objeto
Gotero pasteur
Mechero

2.3 Reactivos:
Violeta de genciana
Safranina
Lugol
Alcohol acetona
Agua destilada
Aceite de cedro

2.4 Equipos:
Microscopio compuesto2.5 Otros:
Mondadientes estériles

III. PROCEDIMIENTO
3.1 Coloración diferencial de Gram
Con un mondadientes picar una colonia de Escherichia coli y Bacillus, y colocarlo sobre una lámina porta objeto.
Dejar secar y fijar por calor
Colocarlo sobre un soporte y cubrirlo con una solución de violeta de genciana, esperar por 2 minutos
Desechar el exceso del colorante y agregar lugol,esperar por 1 minuto.
Desechar el exceso de colorante y agregar etanol-acetona para decolorar, esperar 20 segundos.
Lavar con agua
Añadir safranina (colorante de contraste), esperar 1 minuto
Lavar con agua
Esperar que seque y observar con objetivo de inmersión. Esquematizar.

3.2 Tinción de corpúsculos metacromáticos
Tomar una muestra de un yogurt con el asa de siembra y colocar en unportaobjetos.
Teñir con azul de metileno (descrito en coloración Gram), esperar 2 minutos
En esta preparación se observan dos microorganismos: Lactobacillus (con los corpúsculos metacromáticos en su interior) y Streptococcus (forman cadenas).
IV RESULTADOS
A continuación esquematiza las muestras observadas, dibujando y coloreando, señalando las partes observadas, finalmente escribe lo indicado en...