Microbiologia

Tabla de contenido
Introducción 5
Objetivos 6
Marco teórico……………………………………………………………………………... 7
Desarrollo practico de la coloración de Gram 9
Guía de informe de laboratorio 10
Glosario…………………………………………………………………………………11
Conclusión………………………………………………………………………………12
Bibliografía……………………………………………………………………………….13

























INTRODUCIÓN





En elestudio de la ciencia que nos ocupa, la microbiología, estamos llamados de
manera absoluta y fundamental a la observación de los microorganismos y con
este todo tipo de técnicas o elementos que nos permitan su observación.
Ahondando mas sobre este tema encontraremos, como el microscopio, los
reactivos y todos aquellos elementos que nos permiten trabajar en el laboratorio
se constituyen en piezaclave para la observación e identificación de los
diferentes microorganismos. A continuación, presento el resultado final de nuestra
primera visita al laboratorio.










OBJETIVOS


OBJETIVO GENERAL
Determinar como a través del método de coloración de Gram y de los protocolos de coloración se puede entrar a observar distintos microorganismos.


OBJETIVOS ESPECIFICOS:Conocer e identificar los elementos de trabajo a utilizar dado el caso, Microscopio, Portaobjetos, reactivos y demás.

Aplicar protocolos de higiene y conservación para la toma de muestras.

Analizar como a través de los reactivos se pueden llegar a observar o revelar distintos microorganismos.

Saber enfocar las imágenes atreves del microscopio y diferenciar los distintosmicroorganismos bacilos, cocos etc.…






MARCO TEORICO

La Coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar unaprimera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva las bacterias que se visualizan de color moradas y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella.
 Recoger muestras.* Hacer el extendido en espiral.
 Dejar secar a temperatura ambiente.
 Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado 3 veces aprox.) Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar 1 min. Todas las células Gram positivas y Gram negativas se tiñen de color azul-purpura.
 Enjuagar con agua.
 Agregar lugol y esperar entre 1 minuto.
 Enjuagar con agua.
 Agregar acetona y/o alcohol y esperar 4 segundos (parte critica de la coloración)
 Enjuagar con agua.
 Coloración de contraste agregandosafranina o fucsina básica y esperar 1-2 min Este tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.

Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión.
Explicación
El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto Gram positivas como Gram negativas) a través de la pared bacteriana. El lugol es uncompuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio), el cual está presente para solubilizar el yodo, y actúa de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la celular bacteriana. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizarla decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos sí lo hacen.
Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células Gram...