Microbiologia

Se prepararán las placas con medio de cultivo sólido. En primer lugar se procederá a la
preparación de 500 mL de medio de cultivo líquido MS por grupo (Cada mesa tendrá los
cuatro tratamientosindicados). Las sales inorgánicas (macronutrientes y
micronutrientes) vienen mezclados en un preparado comercial (Sigma, M-5524). En un
vaso de precipitado que contenga aproximadamente 400 mL de H2Odesionizada, se
disuelven 2.15 g del preparado comercial. Seguidamente se añaden 15 g de sacarosa y
0.5 g de mio-inositol. Una vez disueltos los solutos, la disolución se ajusta a pH 6.0 y seenrasa el volumen a 500 mL. En una botella de 1 L (Duran, tapón azul) se echan 4 g de
Phytogel y se vierte con cuidado los 500 mL del medio que se ha preparado. Se
autoclavan en ciclo corto 121ºC a105 kPa durante 20 min.

Una vez autoclavados los medios, se tienen que enfriar hasta alcanzar unos 60ºC. Esta
temperatura permite coger los matraces con la mano, NO TIENEN QUE QUEMAR
ALTACTO. Cuando ha alcanzado la temperatura adecuada, se procede a la adición de
los componentes termolábiles que han sido esterilizados previamente por filtración. Se
añaden los correspondientesvolúmenes de las disoluciones stock: vitaminas 0.5 mL,
fitohormonas o kanamicina según se indica en la Tabla 2. SIEMPRE CUIDANDO DE
TRABAJAR MUY CERCA DEL MECHERO ENCENDIDO, MANTENIENDO
LA BOCA DE LABOTELLA CERCA DE LA LLAMA, Y SIEMPRE
TRABAJAR CON LA MAYOR PRESTEZA POSIBLE.

Una vez añadidos los componentes necesarios, la botella se agita por rotación para
homogeneizar la mezcla, y con lamayor presteza hay que plaquear antes de que se
solidifique el agar.

Se prepararán 15-20 placas Petri con los 500 mL de medio de cultivo estrilizado. HAY
QUE EVITAR DEJAR LAS PLACASABIERTAS. CUANTO MÁS CUIDADO
SE PONGA EN ESTE PASO, MENOS PROBLEMAS DE CONTAMINACIÓN
HABRÁ.

Las placas se dejan solidificar, se cierran con una tira de Prafilm y ya estarán listas para
el día...