MICROBIOLOGIA

Determinación del número de microorganismos
Objetivo.-
Aprenderá las técnicas usadas en el laboratorio para medir la cantidad d celular microbianas.
Material Reactivos
9 tubos de ensayo
1 tubo durham
5 pipetas
1 propipeta
2 mecheros
2 matraz erlen Meyer
3 matraz de aforacion
2 asas bacteriológicas
2 portaobjetos
1 cuba c/ 2varillas
Autoclave
Balanza granataria y balanza analítica
Fundamento.-
Para medir el número de microorganismos se aplican muchas técnicas de la microbiología, razón por la cual se conocen una gran variedad de estos. Entre los dos métodos tenemos dos tipos generales:
» Los que miden el número de células, que son aplicadas en organismos unicelulares como bacterias y levaduras. » Los que midenla masa de células, pueden emplearse con los microorganismos, incluyendo aquellos que son multicelulares como hongos filamentosos.
En esta práctica se utilizo el método de “El numero más probable” (NMP) que es un método de recuento por dilución, donde aquí se utiliza una serie de tubos con medio liquido, en lugar de placas de agar.
En esta técnica las bacterias están uniformemente distribuías enel medio líquido o lo que es lo mismo: muestras repetidas el mismo tamaño, a partir de la misma fuente contendiendo el mismo núm. De bacterias.
Se realiza trabajando en series de 3 a 5 tubos de un medio líquido apropiado para la bacteria que se intenta contar, las cuales se inoculan en diferentes diluciones. Esta técnica se utiliza principalmente en e recuento de bacilos coliformes pero puedeaplicarse a cualquier microorganismos en muestras liquidas.

Procedimiento.-
En esta práctica para tomar la muestra se utilizo la “NOM 014-SSA1-1993” Muestreo de agua para uso y consumo humano en sistemas públicos y privados.
Para el análisis bacteriológico se utilizo un frasco de vidrio con una boca ancha y tapón roscado previamente esterilizado. Se tomo la muestra con mucho cuidado de unestanque en las instalaciones de la preparatoria CbTis #74 checando la temperatura. Una vez teniendo la muestra se cerró el frasco y se introdujo a una bolsa de plástico negra para no ser dañana y así transportarla al laboratorio. Teniendo la muestra se etiqueto de la siguiente manera:







Para la preparación de soluciones y dilución de muestras se utilizo la
“NOM-110-SSA1-1994” Bienes yservicios. Preparación y dilución de muestras de alimentos para análisis microbiológico.
1 » Se preparo la solución reguladora de fosfatos disolviendo el fosfato de sodio monobásico en 500 ml de agua destilada una vez disuelto se aforo a 1 litro de agua destilada. (Solución concentrada)
2 » Al mismo tiempo se preparo el hidróxido de sodio 0.1 N disolviendo 2 gr de hidróxido de sodio y aforándoloa 50 ml de agua destilada, misma solución con la que se ajustaría el pH de la solución reguladora de fosfatos a 7.2.
3 » Ya lista, se tomo 62.5 ml de la solución reguladora de fosfatos concentrada y se aforo a 500 ml de agua destilada, siendo esta la solución reguladora de fosfatos de trabajo.
4 » Una vez preparadas las 2 soluciones, en 1 matraz aparte, se agregaron 90 ml de la soluciónreguladora de fosfatos de trabajo y 10 ml de la muestra a analizar, siendo esta ultima la “Dilución primaria”
5 » Se preparo también el caldo lactosado disolviendo gr de caldo lactosado en poca agua hirviendo en el mechero, una vez disuelto se agregaron los 324 ml de agua restantes y se siguió calentando al mechero hasta que estuviera bien disuelta.
Listas las soluciones procedió allevarlas a esterilizar en la autoclave junto con los tubos de ensaye y las pipetas a 121º por 15 minutos.
*Después de la esterilización se distribuyo en lo tubos de ensayo, teniendo 9 tubos de ensayo, se agregaron 9 ml de caldo lactosado a cada uno de los tubos con una pipeta estéril, teniendo 3 series de 3 tubos de ensayo.
a) A la primera serie de 3 tubos se le agrego con una pipeta estéril en...