Microbiologia

PRÁCTICA Nº 05
Introducción
Existen diversos métodos para cuantificar el número de microorganismos presentes en muestras líquidas y sólidas. Dentro de las técnicas más comunes se encuentra el recuento directo por microscopia de fluorescencia, así como los procedimientos basados en diluciones en serie, haciendo crecer microorganismos en medios de cultivo sintéticos sólidos o líquidos, como elrecuento en placa de Unidades Formadoras de Colonias
(UFC) o la estimación por el método del Número Más Probable (NMP).
El método del número más probable fue descrito por McCrady en 1915 y actualmente sigue siendo ampliamente utilizado. En un principio este método fue empleado para estimar el número de microorganismos en muestras de alimentos y aguas. Sin embargo, se ha demostrado que tambiénpuede ser aplicado para la determinación de microorganismos aerobios y anaerobios en lodos, sedimentos marinos y suelos contaminados, por tanto este método es aplicable para estimar el número de microorganismos en muestras de suelo y agua, tanto para bacterias aerobias como anaerobias.
Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales, capaces de fermentar la lactosa a 44º C en vez de37 ºC como lo hacen los totales.
Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces están formados por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los Coliformes Fecales se encuentran casi exclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se considera que reflejan mejor la presencia de contaminación fecal. Éstos últimos se denominan termotolerantespor su capacidad de soportar temperaturas más elevadas. Esta es la característica que diferencia a Coliformes Totales y Fecales. La capacidad de los Coliformes fecales de reproducirse fuera del intestino de los animales homeotérmicos es favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de materia orgánica, pH, humedad. Desde hace mucho tiempo se han utilizado como indicador ideal decontaminación fecal. Su presencia se interpreta como una indicación de que los organismos patógenos pueden estar presentes y su ausencia indica que el agua o el alimento estudiado se hallan exentos de organismos productores de enfermedades.
* I. Objetivos:
* Familiarizarse con los métodos de recuento, especialmente con el de NMP.
* Detectar bacterias coliformes totales y fecales.
* Detectar sila muestra traída es apta para el consumo humano.
Materiales
* Muestra: Leche
* Medios de cultivo: Caldo Brilla (presuntivo), agar MacConkey, agar Endo, EMB, CB.
* Caldo EC
* Tubos de dilución
* Pipetas
* Bombilla de aspiración
* Placas de Petri
* Mechero Bunsen
* Baño María
* Estufa
* Gradillas
* Anzas microbiológicas calibradas
Procedimiento* a. Método para coliformes totales:
* Preparamos diluciones hasta 10-3.
* Sembramos dos, tres o cinco tubos por cada dilución, según sea el caso.
*
* Los resultados se dan en por gr o mL

* En el caso de agua se sigue de la otra forma:
* Cuando se trate de aguas, los resultados se darán por 100 mL.
* Luego, incubar a 35 ºC ± 1 por 24 h.
* Realizarla 1ra lectura (determinar la presencia de gas). Ésta se observa en las campanas.
* Los tubos que no sean positivos se incuban por otras 24 h más.
* b. Métodos para coliformes fecales:
* Para coliformes fecales se utilizan dos métodos:
* En el Primer Método se cogen los tubos positivos del caldo Lauril Sulfato Triptosa y se lleva una asada al caldo EC utilizando unaasa que tenga 3 mm de diámetro.
* Luego, estos tubos se incuban a 45.5 ºC ± 0.2, en baño María con agitación constante por 24 h.
* Si hay gas a las 24 o 48 h. es positivo para coliformes fecales.
* El Segundo Método es la llamada prueba de Mackenzie.
* En esta se usa el caldo Brila mas agua Peptonada.
* Se parte del caldo MacConkey, los tubos positivos de la...