microbiologia

Microscopía y organización celular

ESTUDIO DE LAS CÉLULAS

Observación de sus
estructuras (incoloras
y translúcidas, con
algunas excepciones
en que hay pigmentos)

Técnicas de
Fijación y tinción

Estudio de
los orgánulos
aislados y de
los componentes
moleculares

Técnica de
fraccionamiento
celular

Estudio de las
actividades
celulares
(movimiento,
reproducción,endocitosis...)

Aislamiento y
cultivo de las
células

Ligado al empleo
y perfeccionamiento
de los microscopios

Localización y seguimiento
de moléculas en la célula

Utilización de
isótopos radioactivos o
anticuerpos marcados.

FIJACIÓN
Es una técnica destinada a impedir la autodegradación enzimática (autólisis) y el ataque
bacteriano (putrefacción) que sufren las células cuando seextraen del organismo o el
organismo muere. Además evita, en lo posible, la alteración de las estructuras originales
en el procesamiento posterior necesario para la observación.
La fijación preserva las características morfológicas y moleculares que tenían las células en
vivo (es como hacer una fotografía del tejido vivo y poder observarla, tras cierto tratamiento,
con el microscopio).Pueden usarse fijadores químicos (formol, etanol, metanol o mezclas fijadoras para
microscopía óptica o bien tetróxido de osmio, paraformaldehido o glutaraldehido para
m. electrónica) o métodos físicos como la desecación, el calor seco, el frío o la congelación.

TINCIÓN
Aumenta el contraste entre las células y el fondo así como entre sus estructuras, mejorando
la observación de las células yde su contenido.
La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos con afinidad específica por algunos
materiales celulares:
- Los colorantes cargados positivamente (azul de metileno, cristal violeta o safranina) se
combinan con los constituyentes celulares cargados negativamente, como ácidos nucleicos
o polisacáridos ácidos.
- Los colorantes con carga negativa (eosina, fucsina ácida orojo Congo) se combinan con
los constituyentes celulares cargados positivamente, como muchas proteínas.
- Otro grupo de colorantes son liposolubles, como el Sudán, y se combinan con los materiales
lipídicos de la célula, usándose a menudo para revelar la localización de gotitas o depósítos
de grasa o las vainas de mielina .

Traqueidas del leño de Pinus
Coloración: safranina

Secciónlongitudinal de raíz teñida
con el reactivo de Feulgen. Se
aprecian los núcleos (teñidos en rojo)

FRACCIONAMIENTO CELULAR
El fraccionamiento celular es una técnica utilizada para separar los distintos orgánulos y
componentes celulares para su estudio. La técnica se inicia con la homogeneización. El
tejido se tritura en un homogeneizador de manera que las células se rompen y liberan sucontenido. Luego se filtra el homogeneizado y se somete a centrifugación a diferentes
velocidades y tiempos, de manera que se obtienen fracciones de los distintos orgánulos.

Animación
Esquema del Proceso de Fraccionamiento Celular (Tomado de: www.genomasur.com)

ULTRACENTRIFUGACIÓN

El svedberg (símbolo S, a veces Sv) es una unidad (no del S.I.) que se usa en
ultracentrifugación para medir elcoeficiente de sedimentación de una partícula o
macromolécula . Esta magnitud tiene dimensiones de tiempo, de modo que un
svedberg equivale a 10-13 segundos. Se nombró en homenaje al físico y químico
sueco Theodor Svedberg, premio Nobel de Química en 1926 por su invención
de la ultracentrífuga.

AISLAMIENTO Y CULTIVO DE CÉLULAS
El primer paso para aislar células a partir de un tejidoconsiste en separar la matriz
extracelular que las mantiene unidas, generalmente utilizando enzimas que la degradan,
obteniéndose así una suspensión de células libres. El segundo paso es el aislamiento
de cada tipo celular, que puede conseguirse mediante centrifugación (que separa las
más grandes o densas de las más livianas), apartando las que se adhieren a un sustrato
de las que no lo hacen o...