Microbiologia

Tema 15: Técnicas de inoculación y siembra. Recuento de colonias.

Las técnicas de siembra e inoculación se pueden realizar:
* Siembra en medio líquido (con asa o con pipeta).
* Siembra en medio sólido (en placa o en tubo).
Cuando se realiza una siembra en medio liquido con asa, primero esterilizamos el asa, luego se extrae la muestra bacteriana (no tocar mucho las paredes del tubo).Para realizar la siembra en medio liquido con pipeta se vierte el contenido de la pipeta sobre el medio de cultivo y se homogeniza.
Técnicas de siembra aislamiento:
Se realiza en placa ,su finalidad es la obtención de cepas puras.
Se hace por aislamiento por dilución o por agotamiento(siembra en estría o en zig-zag , siembra en estría múltiple, técnica de los cuatro cuadrantes y técnica de lostres giros)
-Aislamiento por dilución:
1. Disponer tres tubos de medio de cultivo fundido a 45-50ºC,previamente marcados con los números 1,2,3.
2. Tomamos con el asa de siembra, previamente esterilizada la muestra y siembro en el tubo número 1.
3. Homogeneización por rotación entre las palmas de la mano y tomar un asa del mismo resembrándola al tubo número 2; dejamos el primer tuboen el baño maría a 45ºC.
4. Homogeneizamos el tubo 2 ,tomo un asa y la paso al tubo 3, dejo los dos tubos en el baño maría a 45ºC.Vierto el contenido de cada uno de los tubos homogeneizados en tres placas estériles, marcadas respectivamente con los números 1, 2,3; espero que solidifique el medio , en la placa 3 se obtendrán colonias aisladas.

-Aislamiento por agotamiento:
a. Por estríao en zigzag:

1. Se deposita el inóculo en el extremo superior de la placa.
2. Se siembra con el asa a partir del inóculo con un movimiento de zig-zag , cada vez más amplia( en el medio hay mayor amplitud).Para ello el asa debe de contactar suavemente con la superficie del medio.No se debe realizar una presión excesiva , pues se agrietaría.
3. La siembra se efectúa sin levantar el asani flamearla, hasta la zona distal del comienzo donde se obtendrán las colonias aisladas.

b. Siembra en estría múltiple:

1. Se deposita el inóculo en un extremo de la placa.
2. Con el asa se reparte en varios tramos ,siguiendo el borde de la placa, entre cada tramo se debe flamear el asa.
3. Los segmentos seguidos describen un poliedro regular , el último tramo se efectúahacía el interior en el que se obtendrá las colonias aisladas.

c. Técnica de los cuatro cuadrantes:

1. Se divide la placa en cuatro cuadrantes( se puede rotular con un lápiz graso en la parte posterior.
2. Se deposita el inóculo en el extremo superior de uno de los cuadrantes y se siembra en estría.
3. Sin flamear el asa se realiza la misma operación sucesiva en los otros doscuadrantes; en cada uno de ellos se sembrará el inóculo que queda adherido al asa tras la siembra del anterior.
4. En el último de los cuadrantes sembrados se encuentran las colonias aisladas.

d. Técnica de los tres giros:

1. Se siembra en estría la mitad de la placa.
2. Flamear el asa.
3. Se gira la placa 90º, sembrando en estría la mitad superior de la misma.
4. Se repitala operación de los puntos dos y tres.
5. Las colonias aisladas aparecerán en la zona sembrada en último lugar.
Técnica de siembra para recuento:
A. Siembra de líquido con asa de digralsky (asa en L): Para recuento en Orina.
B. Aislamiento en estría.
C. Siembra por dilución.
Técnica para antibiograma:
Utilizamos:
a) Siembra en estría.

b) Inoculación previa al vertidoen placa.

- (Barry):

I. Se toma 0,1ml de inóculo y se le añade 25ml de medio de cultivo (45-55ºC) para no esterilizar el inóculo.
II. Homogeneizar .
III. Verter en placa petri.
IV. Esta técnica se utiliza mucho para el recuente de viables o para antibiograma.

c) Inoculación sobre la superficie del medio solidificado.:

-( kirby –bauer) :
I. Preparado el inóculo...