Microbiologia

TOMA DE MUESTRA DE MANIPULADORES
La toma de muestra de las manos de los manipuladores se realiza para detectar portadores de Staphylococcus aureus tanto en manos como en cavidad naso-faríngea. Esta técnica de toma de muestra puede utilizarse para detectar otros microorganismos en manipuladores, como E. coli o coliformes fecales en manos.

MANOS Material para tomar muestras de manos:
• •Tubos de tapa a rosca que contengan 2,0 – 3,0 ml de agua peptonada al 0,1%, buffer fosfato, solución Ringer). Hisopos de algodón, esterilizadas separadamente en tubos de ensayo.

Método de toma de muestra de manos:
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Humedecer el hisopo en el diluyente y lavar la superficie de la palma de la mano haciendo rotar el hisopo Lavar el hisopo en el diluyente, drenar el exceso de líquido enla pared del tubo. Lavar la zona entre los dedos, repetir la limpieza del hisopo y pasar el hisopo entre las uñas. Finalizando el lavado quebrar el hisopo en el lugar donde se tomó, dejando caer la porción con algodón dentro del tubo o frasco con diluyente. Repetir la misma operación para la otra mano. Ambos hisopos se colocan en el mismo tubo con diluyente, es decir se consideran una solamuestra.

Siembra para S. aureus. 1. Agitar fuertemente el hisopo en los tubos con el diluyente, utilizando un agitador tipo Vortex, para lograr un buen lavado de los hisopos. 2. Sembrar en la superficie de cada una de las 2 placas con agar Baird Parker (con telurito y lecitina) 0,10 ml del líquido del lavado, esparciendo con un “espátula”. 3. Incubar las placas en posición invertida a 35-37 ºCdurante 30 y 48 horas. 4. 1º lectura a las 30 horas de incubación: elegir las placas que contengan entre 20 y 200 colonias aisladas y contar todas las colonias que muestren las dos reacciones características diagnósticas de lipólisis y proteólisis: se producen halos y anillos característicos de margen estrecho y blanco (por precipitación de sales de Ca y Mg, por los ácidos grasos liberados) y queaparezcan rodeadas por zonas claras (por reducción de la lecitina) que contrastan con la opacidad del medio. y, debido a la reducción del telurito a teluro, se desarrolla una colonia negra. 5. La reacción con la yema del huevo y la reducción del telurito se presentan con notable paralelismo con la coagulasa-positividad. 6. Marcar la posición de estas colonias e incubar las placas hasta 48 hs. 7. 2ºlectura, a las 48 hs. de incubación :contar todas las colonias que presentan el aspecto mencionado y también aquellas cuyo color sea negro brillante con o sin margen estrecho blanco y que no presenten el área de aclaramiento.

8. Llevar a cabo la prueba de coagulasa con un número significativo de colonias sospechosas de corresponder a S. aureus ( no menos de 5). 9. Las colonias de algunas cepas deS. aureus pueden estar rodeadas de una zona opaca a las 30 horas de incubación, pero un número mayor de cepas pueden mostrar este aspecto a las 48 hs.(colonias sospechosas de ser S. aureus). Contar estas colonias a las 48 hs. y someterlas, a un número adecuado de ellas ( no menos de 5) si son muchas, a la prueba de la coagulasa. Así se distinguirán estas cepas (coagulasa positivas) de las S.epidermidis (coagulasa negativa), que puedan tener un aspecto semejante. Tomar y someter a la prueba de coagulasa una parte proporcional de todos los tipos de colonias sospechosas que han sido incluidas en el recuento de presuntos S. coagulasa (+). 10. Sumar el número de colonias que presentaban zonas claras a las 30 hs. de incubación, la proporción de las que producían coágulos en los apartados 7 y 8anteriores. 11. NOTA: Más del 90% de la cepa de S. aureus forman las colonias características negras rodeadas de una zona clara, después de incubar 30 hs. a 35-37ºC, es importante que las lecturas se hagan a las 30 hs. y no antes. A las 48 hs. un 5 a un 7% más de cepas de S. aureus muestran el aclaramiento característico, a menudo con una zona opaca más interna. Sin embargo, en este momento los...