Microbologia de lo hongos

1. OBJETIVO

Aprender a hacer un banco de diluciones a través de una muestra original.

Hacer recuento de colonias con un recuenta colonias y distinguir con una lupa las diferentes colonias de microorganismo que hemos obtenido.

Hacer siembras de microorganismo con diferentes métodos de siembra y diferentes medios de cultivos.

Saber que medios de cultivos van bien para que proliferen losmicroorganismos.


2. FUNDAMENTO TEÓRICO

· Medio de cultivo columbia: utilizado para cultivar y aislar microorganismos en general y en particular de aquellos que son especialmente exigentes. Este medio permite la adición de sangre, factores de crecimientos u otros componentes selectivos.
Las peptonas aportan la base nutritiva, el almidón la fuente de energía y el sodio cloruro mantienen elnivel salino.

· Medio manitol: se emplea para el aislamiento y recuento de estafilococos patónegos en productos lácteos, cárnicos, marinos y otros alimentos. También en productos farmacéuticos y cosméticos.
Este medio se basa en que los estafilococos pueden crecer con una concentración de 7,5% de sodio cloruro a diferencia del resto de bacterias y más en el caso de los patógenos. La presenciade estafilococos en el medio hace que vire del color rojo fenol al amarillo debido a que fermentan el azúcar.

·Medio glucosa Sabouraud: para el cultivo de hongos y levadurassirve para detectarlos en alimentos u otros materiales. El medio líquido es indicado para pruebas de esterilidad y los agares para hongos y levaduras. Suele incoorporarar antibióticos para evitar el crecimiento bacteriano,así hacerlo un medio selectivo y diferencial.

· Medio Macconkey: utilizados para la investigación de microorganismos coliformes. Medio preparado con sales biliares y cristal violeta inhibe el crecimiento de gram positivas. Y la presencia de lactosa hace que las bacteria lactosa-positivas cambien el rojo neutro y crezcan colonias rosadas y la lactosa negativas formarán colonias incoloras.

·Medio levine: para diferenciación de bacilos entéricos y microorganismos coliformes. Se puede identificar E.coli y enterobacter. La eosina y el azul de metileno inhiben parcialmente a grampositivos y los lactosa positvos de los negativos. Los coliformes dan colonias violeta oscuro mientras los lactosa negativos dan colonias incoloras. Si se añade antibióticos se puede detectar candida albicans.3. PROCEDIMIENTO, LECTURAS Y CÁLCULOS

Práctica 4.1: RECUENTO Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

Procedimiento
Preparamos 4 tubos de ringer con 9ml cada tubo, que nos servirán para realizar el banco de disoluciones.

De la muestra original pondremos 1ml al primer tubo ringer. Para coger el mililitro tiene que ser con una pipeta esterelizada metida en un sobre de papel deestraza y con un algodón en la parte de arriba para que a la hora de pipetear el algodón haga de barrera de los microorganismos. Este primer tubo se enumerará con el número -1, de este tubo cogeremos otro mililitro que pasaremos al siguente tubo de ringer que numeraremos como -2. Así procederemos igual con el siguiente tubo serà menos -3 y para el último tubo realizaremos la mismo operación y lellamaremos -4. Cada vez que hagamos uno de estos pasos se cogerá una pipeta nueva.

Cada vez que se abra un tubo de ringer tenemos que flamear el cuello del tubo y al cerrarlo también. Nunca dejar el tapón encima de la mesa del laboratorio.

Del tubo –2, -3 y 4 cogeremos dos gotas (0'1ml 1/V) y lo echaremos en una placa de agar que tendrá un cultivo de TSA y lo extenderemos con una espátula deDrigaski. Evitando abrir mucho la placa para que no se contamine con otros microorganismos. La espátula de Drigaski cada vez que se use hay que desinfectarla con etanol y la llama y también al terminar de utilizarla.

Las placas las colocaremos en la incubadora entre 24-48horas.
Cálculos:

-1: F= 1/10 = -1

-2: F=1/10 · 1/10 = -2

-3: F=1/10 · 1/10 · 1/10 = -3

-4: F=1/10 · 1/10...