Microcultivos
FUNDAMENTO:
Permite la observación del Las estructuras microscópicas de hongos filamentosos que se distinguen con facilidad sin distorsión, alteración o rompimiento de lasmismas. Esto pasa cuando el hongo se desarrolla directamente bajo el portaobjetos.
Forma parte de las pruebas para identificar el género y la especie de los hongos.
Los microcultivos permiten hacer elseguimiento del desarrollo de hongos en estudio .Los cultivos en placa se obtienen sembrando por picadura el centro de las cajas que contienen diferentes medios.
PREPARACION:
En una placa dePetri de vidrio, colocar:
a. Un disco de papel de filtro en el fondo.
b. Un tubo de vidrio en forma de "V"
c. Dos vidrios portaobjetos (uno excavado)
d. Dos cubreobjetos
.e. Esterilizar elconjunto en horno Pasteur
MÉTODO A
1. Colocar un cuadrado de A. Sabouraud (de poco grosor) de 0,5 cm. de lado sobre un portaobjetos
2. Inoculación del hongo: Tomar con asa de micología (o con asa depicadura) una muestra mínima de micelio de la colonia a investigar. Inocularla en el centro del cuadrado. Cubrir con un cubreobjetos estéril.
3. Añadir agua destilada hasta empapar el papel de filtroy colocar en su posición el vidrio portaobjetos con el inóculo. Tapar la placa petri.
4. Incubar a 25 ºC. , observándolas diariamente, hasta que se considere que el crecimiento es adecuado parala observación al microscopio (añadir agua si es preciso, para mantener húmedo el ambiente en la cápsula petri)
5. Observar con objetivo (x10, x40).
MÉTODO B
1. Con pipeta Pasteur estéril,añadir en 1 gota de A. Sabouraud (medio fundido a 45ºC) en la concavidad del porta excavado. Esperar 2 minutos a que el agar solidifique.
2. Con asa de Kolle, sembrar con esporas del hongo a estudiar.
3. Con un palillo añadir silicona a los 3 lados alrededor del pocillo, dejando el cuarto sin silicona para permitir la entrada de aire, manteniendo así el ambiente aerobio.
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