Microorganismo

Producción de metabolitos secundarios

Shikonina

VENTAJAS DE PRODUCIR METABOLITOS IN VITRO

•Independencia de factores geográficos, estacionales y variaciones ambientales •Son sistemasde producción definida que aseguran un suministro contínuo y uniforme de producto en cuanto a calidad y rendimientos •Es posible producir compuestos nuevos no presentes en las plantas madreBiomass

0,25 0,2 0,15 0,1 0,05 0

0

3

7

11

15

18

22

25

29

32

Time (days)

Biomass (g dry wt/ batch 50 ml)

0,3

Evaluación de la acumulación de metabolitosMétodos de extracción
Medio Separación de la biomasa Biomasa • Secado o liofilizado • Extracción con solventes Extracciones líquido-líquido

Métodos de separación
Técnicas cromatográficas CC CCD HPLC GCEC

Evaluación de la acumulación de metabolitos Métodos de determinación estructural
Técnicas espectroscópicas
RMN UV IR

Polarimetría Técnicas espectrométricas EM

Métodos de análisiscuantitativo
HPLC (UV, IR, EM, etc) GC (EM, FID, etc) UV EC (EM, UV, Fluorométricos, etc) Métodos inmunológicos

Cinética de acumulación de metabolitos

Acumulación de metabolitos secundarios ydesarrollo de biomasa

Modelo de acumulación asociado al crecimiento

Artemisia douglasiana Besser

hojas

tallos

hip

Modelo de acumulación no asociado al crecimiento

Otros factoresque afectan la acumulación de metabolitos secundarios: concentración de fitorreguladores tamaño del inóculo

5,5 5
Grindelic acid mg/gDW

Grindelia pulchella
cells media

4,5 4 3,5 3 2 2,5 1,5 10,5 0 20/18 5% 20/18 10% 20/4.4 5%

20/4.4 10%

Fitorreguladores: IBA/BAP

Acido grindélico

Las líneas celulares pueden sufrir: • cambios genéticos (aberraciones cromosómicas,fragmentacione nucleares, endorreduplicaciones) La frecuencia de estas anormalidades incrementa con la edad de los cultivos (las células aneuploides y poliploides se dividen más rápido que las normales)...