micropropagacion vegetal

Micropropagación vegetal.
A partir de una planta, poder clonarla y crear miles o cientos de estas. En vez de utilizar semillas, se clona una en particular para que sean todas exactamente iguales.
Luego de elegir la planta que se va a propagar, se elige que parte de la planta se va a micropropagar. Las células meristemáticas tienen alta taza de multiplicación, son indiferenciadas y por esototipotentes (adquieren cualquier función). Estas células están en los meristemas, por donde crece la planta. De todos los meristemas, cuanto más joven seamejor, por lo que convienen el ápice y el radicular.
Se corta esa parte de la plata y se lo desinfecta exteriormente con lavandina 20% o alcohol 70%. Si estuviese muy sucio, primero se procede a lavarlo. Tiene que quedar limpio, sin insectos, nihongos.
TODA MICROPROPAGACIÓN SE TIENE QUE REALIZAR EN ESTERILIDAD: En el laboratorio se va a trabajar en un área especial con un equipo específico que se llama “flujo laminar”. Es una cabia de 1,5 m que desde a parte de atrás larga hacia delante aire estéril. Este aire viene como si fuera en láminas (capas). Esto crea adentro de la caja un ambiente estéril. Todo tiene que ser estéril, el mediode cultivo (meristema), materiales de metal (tijeras, pinzas, bisturí y lupa) estéril, y agua estéril.
Fuera del flujo laminar se corta todo lo sobrante hasta quedar con el meristema. Se desinfecta nuevamente 30 s en alcohol 70 como para matar completamente cualquier microorganismo. En el flujo laminar se saca ese fragmento, se lo enjuaga con agua estéril, y se lo aparta en la caja de Petri; unavez realizado esto, se puede empezar a trabajar.
El meristema debería ser un cubito de no más de 5mm. Una vez obtenido esto, se lo pasa por alcohol, se enjuaga con agua estéril y a la caja de Petri con medio de cultivo. A esta caja de Petri se la lleva a una habitación con luz, temperatura, y humedad controlada, con las condiciones óptimas para que se desarrollen células y se multipliquen. Lahumedad va a ser alta para que medio de cultivo no se deshidrate.
Después de unos meses, como resultado va a haber una masa de células sin ninguna forma específica llamada callo.
Hay dos vías para continuar con la micropropagación, aunque no siempre se pueden elegir:

VÍA MORFOGENÉTICA (+rápida,+barata,-plant)
VIA EMBRIOGENÉTICA (+lenta, +cara,+plantas)

La elección de una u otra vía dependede que no todas las plantas aceptan las dos vías.
De la mayoría de las plantas no se conoce como lograr esto por lo que hay que hacer pruebas.
También depende de cuantas plantas querés fabricar.
El medio de cultivo más utilizado para las plantas es el MS (morashige skoog). Tiene agua destilada con fuente de energía (sacarosa de laboratorio), micronutrientes y macronutrientes (generalmentesales), hierro unido a una sustancia llamada EDTA (a la cual se pega el hierro y lo deja disponible para las plantas). También se le agregan sales de buffer (fosfato de sodio) para regular el pH al de la célula (6,7-7,2). Además se regula la concentración iónica igual al del citoplasma de la célula (PEG-reguladores). Si se quiere obtener un medio de cultivo sólido se le agrega solidificante (ej.: agaragar).
Preparación del MS: una vez que se disuelve todo en agua hay que calentarlo para que se disuelva el agar agar hasta los 70ºC. Una vez que está disuelto se vuelca en los recipientes en donde se va a utilizar y se deja enfriar.
Una vez que se enfrió, se envuelve en papel de diario y se autoclava (forma de esterilización por vapor caliente). Se necesita que el vapor este a 121ºC. Es comosi fuera una olla a presión, y se deja 17 min a esta temperatura, con una atmósfera de 1,5.
Se deja una válvula abierta para que salga todo el aire.
Cajas de Petri: se las deja varias horas para que el MS se vuelva a enfriar.

No todos los microorganismos mueren a los 100ºC, por eso es necesario hacerlo a 121ºC.
Si el MS requiere vitaminas y/o hormonas se agregan después del autoclavado...