microrganismos







Muestreo de Bacterias Gram positivas y negativas
“Levadura, Escherichia coli y Bacterias Bucales”.




Valparaíso, 10 de Noviembre 2013


Introducción
En el área de la microbiología, se estudian una gran cantidad de microorganismos, uno de los grupos más conocidos y estudiados corresponde a las bacterias, debido a que estas son una amenaza permanente a la salud humana, ypara ser combatidas, se necesita primeramente realizar una identificación de esta.
Las bacterias se pueden dividir en dos grandes grupos, Gram positivas y Gram negativas en este caso, los términos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga eléctrico, sino simplemente designan dos grupos morfológicos distintos de bacterias. Su diferencia relevante en la clasificación a través de latinción, son las características de la pared de estas.
El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el peptidoglicano. La pared de la célula gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectandas de peptidoglicano así como algo de ácido teicoico. Generalmente, 80%-90% de la pared de la célula gram-positiva es peptidoglicano. La pared de la célula gram-negativa, por otrolado, contiene una capa mucho más delgada, únicamente de peptidoglicano y está rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas. Sólo 10% - 20% de la pared de la célula gram-negativa es peptidoglicano” [1]
Para poder realizar esta clasificación en las bacterias se realiza el procedimiento la tinción de Gram, es una de las tinciones más utilizadas enel estudio de estas.
“La tinción propuesta por el médico danés Christian Gram en 1884, es una de las tinciones diferenciales más utilizadas en bacteriología, que clasifica los cultivos bacterianos de menos de 24 horas en Gram positivas y Gram negativas. La reacción de la tinción de Gram se basa en la cantidad de peptidoglucano que se encuentra en las paredes celulares de estas bacterias.” [2]Esta importante diferencia estructural, es la responsable de que las bacterias de Gram positivas y de Gram negativas tiñan de distinto color y con ello puedan ser distinguidas, dependiendo de la reacción que estas tengan con los elementos que serán mencionados y especificados posteriormente.
En la presente actividad practica, se procede a realizar el procedimiento de tinción de Gram que con tresmuestras, las primeras dos, en un comienzo son desconocidas, y la tercera es obtenida de los dientes, unos segundos antes de realizar con ella la tinción.
Objetivos
Definir la importancia que tiene la tinción de Gram en la clasificación de bacterias
Desarrollar óptimamente los procedimientos de la técnica de tinción de Gram.
Analizar cómo influyen las diferencias estructurales de una bacteriade gran positiva y gran negativa al utilizar la tinción.
Distinguir las formas que posee cada muestra, en el microscopio óptico.
Analizar y comparar las muestras problemas.
Establecer a que Gram perteneces las muestras utilizadas.

Procedimientos
Materiales:
Mechero de alcohol
Bandeja de tinción
Asa
Fósforos
Gradilla
Tubos de ensayo
Agua
Portaobjetos
CubreobjetosMicroscopios
Aceite de inversión
Bastoncillos de algodón

Muestras:
Un inoculo de Levadua
Un inoculo de Escherichia coli
Una placa dental

Tinciones:
Cristal violeta
Mordiente (Lugol)
Solución decoloradora (50% alcohol y 50% acetona)
Colorante de contraste (safranina)
Preparación de las muestras
Muestra nº 1:
Se comienza prendiendo el mechero, con el fin de utilizarlo para laesterilización del asa, la cual posteriormente se enfriar en la boca del tubo de ensayo. Cuando se encuentra fría se procede a tomar un inoculo de la muestra líquida del interior del tubo, que se debe extender sobre el portaobjetos. Finalmente, se pasar el portaobjeto sobre el mechero para fijar y deshidratar la muestra.
Muestra nº 2:
Primeramente se tiene que esterilizar el asa en el mechero, para...