Microscopía y Técnica Histológica

MICROSCOPÍA Y TÉCNICA HISTOLÓGICA

El estudio de Biología Celular y Tisular está basado en este tema, ya que nuestra visión a pesar de ser un
sistema óptico bien estructurado algunas veces necesita de una lupa o anteojos para observar detalles; sin
embargo no nos permite el deleite de la anatomía microscópica del cuerpo humano, es por eso que a lo
largo de este capítulo nos centraremos enlos instrumentos y técnicas que se emplean en Histología.
MICROSCOPIO ÓPTICO (Microscopio de luz, campo claro)
Es un instrumento que produce una imagen aumentada de un objeto. Se compone principalmente de tres
sistemas: mecánico, iluminación y óptico.
Mecánico: ocular, cabezal, revólver, objetivos, brazo, platina, tornillos macrométricos y micrométricos,
base.
Iluminación: fuente de luz,condensador.
Óptico: lente del ocular, lentes de los objetivos, lente del condensador.

La fuente de luz es una bombilla eléctrica con un filamento de tungsteno que generalmente se encuentra
en la base del microscopio, ilumina la muestra. Los rayos de luz viajan hasta encontrar la lente del
condensador quien reúne los rayos difusos en forma de cono luminoso hasta el espécimen que al ser
iluminadopor luz blanca se ve sobre un fondo blanco (campo claro).

Las lentes del objetivo reciben los rayos de luz que han atravesado la muestra. Aquí se lleva a cabo la
formación de una imagen real, invertida con una primera magnificación.
En la lente ocular la imagen se vuelve a aumentar, es virtual y derecha.
De lo anterior surge un concepto llamado aumento total el cual se define como elproducto del aumento
del objetivo y el aumento del ocular.
(Ocular 10X) (Objetivo 4X)= 40X
(Ocular 10X) (Objetivo 10X)= 100X
(Ocular 10X) (Objetivo 40X)= 400X
(Ocular 10X) (Objetivo 100X)= 1000X

Finalmente esa imagen virtual y aumentada pasa hacia un tercer sistema óptico formado por el ojo, para
proyectarse en la retina como una imagen real y aumentada.
A manera de ejemplo imagine que deseavisualizar una célula en mitosis con 40X sólo se visualizan puntos
dentro de la célula, queremos observar la metafase pero se dificulta ya que están muy cerca los
cromosomas, así que aumentamos hasta 400X pudiendo entonces ver estructuras separadas, con el
siguiente objetivo vemos más grandes los cromosomas incluso sus cromátides. Un aumento más a los ya
comentados, por ejemplo con una lenteocular de 20X sólo hará una imagen borrosa sin ver más detalles
de la imagen a lo que se conoce como aumento vacío porque no se incrementa el poder de resolución.
Definiremos poder de resolución como la capacidad de la lente para discriminar dos puntos vecinos como
entidades distintas, esto es lo que define la calidad de la lente de los objetivos. Sin embargo el límite de
resolución es ladistancia mínima que debe existir entre dos puntos para ser discriminados como dos cosas
diferentes y está determinado por la siguiente ecuación:
d= (0.61)()
sin 
Donde:






d: distancia mínima entre dos puntos que permite verlos separados
0.61: constante de Abbe
 La longitud de onda en este caso 527nm o 0.527m para la luz blanca
 El índice de refracción del medioque queda entre la muestra y el objetivo. Es la velocidad de
dispersión del rayo de luz a través del medio (aire=1 o aceite de inmersión=1.5).
El ángulo del cono de luz que entra al objetivo, máximo 90º, por lo que sin 90º=1, también
llamado AN del condensador.

El denominador de la ecuación recibe el nombre de apertura numérica (AN) es constante para cada lente
con aire como medio y es1.0 como máximo ya que el índice de refracción del aire es 1 por el seno de 90º
que es 1.

De acuerdo con el fabricante, los objetivos varían de AN, ésta se encuentra grabada en cada uno de ellos:
AN objetivo 4X: 0.1
AN objetivo10X: 0.22
AN objetivo 40X: 0.64
AN objetivo 100X es 1.25 ya que se utiliza con aceite de inmersión.
Si calculamos el límite de resolución de los objetivos arriba...