microscopia 2

Universidad Andrés Bello
Facultad de Odontología
Laboratorio de Biología Celular y Genética
Profesores:







TRABAJO PRACTICO N° 2
Microscopia II
Bio-131









Introducción
En el transcurso del tiempo se han inventado diversastécnicas, métodos e implementos que contribuyan con el análisis de diversas muestras a través de un microscopio. Estos facilitan la interpretación de la muestra según los requerimientos específicos del científico. Entre alguno de estos se encuentran el método de campo claro, campo oscuro, la cámara de Neubauer y la reglilla.
El campo claro es la forma más simple de microscopía, donde la luz pasa a travésdel espécimen. La iluminación no se altera por complemento aun que cambien las propiedades de la luz (como polarizadores o filtros)1.
La microscopia de campo oscuro es una técnica de contraste donde solo la luz difractada desde el espécimen se usa para formar la imagen. El espécimen aparece brillante contra un fondo oscuro2.
Estos dos métodos anteriormente nombrados son de vital relevanciapara el desarrollo del conteo celular, este se basa en tomar una muestra de una población existente mediante la extracción de una cantidad reducida de la muestra, con el propósito de calcular la cantidad original de la población. Esta técnica se realiza a través de la cámara de Neubauer la cual ubica los organismo en unos cuadriculados (25 cuadros) de 0.2 mm los se originan otros 16 cuadros de 0.05mm3.









Materiales y Métodos

Actividad 1:
Se hizo entrega de parte de los profesores una muestra de frotis de sangre no identificada, la que se procedió a observar en el microscopio en un aumento de 40X con los métodos de campo claro y campo oscuro. Para poder realizar este último método se hizo entrega de un círculo de cartón negro que fue puesto sobre la fuente de luz demanera que la luz solo pase por los bordes del círculo. Luego lo observado en cada método fue dibujado.
Actividad 2:
Se visualizó en el microscopio en 10X y 40X con una reglilla en el ocular la misma muestra de frotis de sangre no identificada usada anteriormente. La reglilla contiene 100 unidades sin unidades, por lo que se necesitó usar una taba de calibración, descrita en los resultados másadelante. Luego se procedió a medir 3 eritrocitos en cada uno de los aumentos respectivamente y se sacó un promedio con los resultados.
Actividad 3:
Se puso sobre un portaobjetos una muestra previamente preparada, por los docentes que consistía en 5 μL de sangre no identificado con 1000 μL de suero fisiológico, que posteriormente se cubrió con el cubreobjetos. La gota del preparado fue puesta porun costado del cubreobjeto, para que ingresara por capilaridad. Esta muestra se puso sobre una Cámara de Neubauer y se observó en el microscopio en 40X. Posteriormente se realizó un conteo de los eritrocitos contenidos en cada cuadrado de la Cámara de Neubauer y se sacó un promedio de la cantidad de células contenidas en la muestra.








Resultados

A. Campo Oscuro
Procedimientosy observaciones de una muestra fresca de sangre
Para observar las muestras se utilizó un microscopio óptico y dos técnicas: campo claro y campo oscuro. Para este último método se facilitó un círculo de cartón negro que se colocó en la fuente de luz.
¿Cuál es la diferencia en la observación con el microscopio de campo claro y el de campo oscuro? ¿Cuál es el efecto obtenido? Describa este cambioobservando con el objetivo 40X.
La diferencia entre estas dos técnicas es que en la de campo oscuro se pudo observar la muestra con relieve, contraste y brillo lo que imposibilitó la observación de organismos internos, en cambio en la técnica de campo claro se pudo observar la muestra con mejor iluminación (ya que esta no se encuentra interferida) y mayor detalle en colores. En esta última se...