Microscopia Con Focal

Microscopia confocal
* CARACTERISTICAS GENERALES1:
El Microscopio confocal, es un microscopio óptico que incorpora dos diafragmas:
- un diafragma de iluminación localizado tras la fuenteluminosa denominado Pinhole de Excitación, cuya utilidad es eliminar la luz proveniente de planos superiores e inferiores al plano focal, aumentando con ello la claridad y resolución de la imagen; y
- undiafragma de detección, de tamaño variable situado delante del fotodetector, denominado Pinhole de Emisión

 Manuel Reina , Univ. deBarcelona(http://www.ub.es/biocel/wbc/images/fluorescencia/clsm.jpg)
* Factores que influyen en la obtención de una buena imagen1:
 
* Alta precisión y velocidad en el barrido
* Pinhole continuamente variable
* Resolución hasta los 2048 x 2048pixeles
* Controles independientes del PMT, amplificadores, filtros y configuraciones.
* Un detector y un pinhole por canal
* Un filtro optoacústico para el control de cada láser
*Disminución del ruido
* Escaneos seriados para la realización del objeto en 3D
* USOS:
* expresión y localización de moléculas en 2 o 3 dimensiones permitiendo reconstruccionestridimensionales, tanto en cultivos celulares comotejidos histológicos;
* estudios de colocalización de proteínas u otro tipo de moléculas;
* transporte intracelular, endocitosis;
* medidas deconcentraciones de iones intracelulares;
* desarrollo y expresión génica;
* hibridación in situ con sondas fluorescentes;
* FLUOROCROMOS2:
Los fluorocromos son sustancias que tienenla propiedad de emitir un fotón de una longitud de onda determinada cuando captan (son exitados) por un fotón incidente de una longitud de onda característica.
Uno de los problemas de la utilización defluorocromos en microscopía de fluorescencia es la pérdida de ésta debido a las grandes intensidades de luz empleadas. Las muestras empleadas en esta técnica no pueden observadas durante largos periodos...