Microscopia Confocal De Barrido Laser

REPORTE DE ESTANCIA I
TITULO DEL PROYECTO:
“Implementación de protocolos de preparación de
muestras biológicas y su observación mediante
microscopia de fluorescencia”
PRESENTADO POR:
BLANCA MARLEN TRÁNSITO LÓPEZ

ASESORADO POR:
Dra. María de Jesús Flores Perea

RESUMEN
La Microscopía Confocal de Barrido Laser) nos permite el estudio de
muestras orgánicas e inorgánicas que por su naturalezafluorescen debido
a la clorofila existente y si no es así pueden ser marcadas con sustancias
específicas como pueden ser fluoróforos o cromóforos para el estudio de
interés en base a su composición.
El MCBL a diferencia del microscopio óptico tradicional, nos permite obtener
imágenes de mayor nitidez y contraste, mayor resolución vertical y horizontal
Algunos de los beneficios del MCBL son queproporciona información de las
estructuras de muestras orgánicas e inorgánicas.

La MCBL es una herramienta de observación, caracterización y análisis en
diferentes áreas como: médica, ambiental, alimentaria, química y de los
materiales, entre otras disciplinas de la ciencia y la tecnología.
Este Microscopio permite obtener:
Imágenes 2D, imágenes en 3D las cuales permiten el estudio del interior de
lasmuestras, Series de tiempo el cual permite realizar experimentos en
tiempo real controlando la temperatura, CO2 y humedad

La MCBL permite caracterizar la estructura de materiales oleaginosos, tal es
el caso de la semilla de Ricinus communis (higuerilla), la información
obtenida mediante esta técnica, permitirá la obtención de parámetros
morfométricos relevantes en el aprovechamiento integral y unaadecuada
explotación en el área alimentaria y energéticos.
Gracias al estudio mediante la microscopia de estas semillas (Ricinus
communis) la Dra. María de Jesús flores Perea demostró que las semillas
tienen un alto contenido de aceite (51.6 % bh) y proteínas (28.5 % bh),
minerales (Mg, P, S, K). Debido a su composición, la semilla puede ser
utilizada para extraer lípidos. Por lo tanto, elobjetivo de esta estancia fue
implementar un protocolo de preparación de la semilla de higuerilla para su
observación mediante microscopia de fluorescencia.

2

CONTENIDO
1. Introducción………………………………………………………….. 4-38
1.1 Técnicas de Microscopia………………………………….. 4
1.2 Microscopio Confocal……………………………………... 5
1.3 Fluorescencia………………………………………………… 8, 9, 10
1.4 Fluorócromos………………………………………………….11, 12, 13
1.5Preparación de muestras…………………………………..13
1.6 Fijación………………………………………………………… 13-16
1.6.1
Deshidratación……………………………………………16
1.6.2
Sustancia Intermediaria…………………………………16
1.7 Inclusión……………………………………………………….. 17, 18, 19
1.8 Corte…………………………………………………………… 19-23
1.8.1.1
Micrótomo de parafina……………………………..... 20
1.8.1.2
Micrótomo de congelación (criostato)……………. 21
1.8.1.3
Ultramicrótomo…………………………………………. 221.8.1.4
Vibratomo……………………………………………….. 23
1.9 Tinción y/o contraste………………………………………... 24
1.1.0 Observación………………………………………………………. 25-34
1.1.1 Microscopio Óptico………………………………………………26, 27, 28, 29
1.1.2 Microscopio Electrónico…………………………………………29, 30, 31, 32
1.1.3 Esquema del proceso histológico……………………………. 32, 33, 34
1.2.0 Semilla Ricinus communis (Higuerilla)………………………... 35-38
1.2.1 Aceite deRicino………………………………………………….. 36
1.2.2 Extracción de aceites…………………………………………… 36
1.2.3 Fundamentos de secado………………………………………. 37
1.2.4 Análisis de Imágenes……………………………………………. 38
2. JUSTIFICACIÓN……………………………………………….…… 39
3. OBJETIVOS ………………………………………………………… 40
4. PROCEDIMIENTO………………………………………………….. 41-47

4.1
4.2
5.
6.
7.
8.

Análisis de las semillas Ricinus communis pos medio del MCBL…41-45

Proceso para la extracción de aceite de lasemilla “Ricinus
communis”…………………………………………………….. 46, 47
RESULTADOS……………………………………………………….. 48,49
CONCLUSIONES…………………………………………………... 50
REFERENCIAS………………………………………………………. 51
ANEXOS………………………………………………………….…. 52-53

8.1
8.2

Uso de Software ZEP…………………………………………. 52
Microscopio confocal multifotónico……………………... 53
3

1. INTRODUCCIÓN
1.1 Técnicas de Microscopia
Tipos de
microscopía...