microscopia optica y tinciones
Páginas: 6 (1415 palabras)
Publicado: 10 de septiembre de 2014
INTRODUCCION
El estudio de los organismos vivos requiere de aparatos de precisión como lo es el microscopio
El instrumento esencial para el avance en el estudio de la célula ha sido el microscopio; un instrumento mecánico óptico que permite ver objetos muy pequeños “más grandes”.
El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con el microscopioóptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea. El modo más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes.
Si se desea simplemente aumentar el contraste de las células para la microscopía, son suficientes los procedimientos que usan un solo colorante llamados de tinción simple. Sin embargo, a menudo se utilizan métodos que no tiñende igual modo todas las células, es el proceso denominado tinción diferencial. Uno muy usado en microbiología es la tinción Gram. Basándose en su reacción a la tinción Gram, las bacterías pueden dividirse en dos grupos: grampositivas y gramnegativas. Esta tinción tiene gran importancia en taxonomía bacteriana ya que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias.OBJETIVO
Que el alumno aprenda las técnicas de preparación de frotis, de fijación y coloración más utilizadas en el estudio microscópico de cultivos bacterianos, obtenidos de medios sólidos y líquidos. Que identifique las principales formas bacterianas y la importancia de las tinciones simples en la caracterización morfológica de estos microorganismos.
MATERIALES
1 mechero.
1 asa desiembra.
5 Portaobjetos.
Piceta con agua destilada esteril.
Microscopio de campo claro.
SUSTANCIAS
Alcohol etílico.
Aceite de inmersión.
Cultivos bacterianos
Muestra biológica
PROCEDIMIENTO
1. Lavar cada uno de los portaobjetos, secarlos y nombrarlos.
2. Flamear el asa de siembra para esterilizarla.
3. Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetolimpio.
4. Tomar una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua.
5. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida.
6. Acercar el portaobjetos con la muestra hacia la llama del mechero para secar y fijar la muestra.
7. Llevar la muestra hacia un ambiente previamente desinfectado.8. Agregar unas gotas de Violeta de genciana y dejar reposar 2 minutos.
9. Limpiar el exceso de colorante, lavándolo con agua destilada estéril y repetir el procedimiento con los 3 colorantes de Gram restantes.
10. Repetir el paso 8 y 9 para las demás muestras a observar y analizar.
11. Finalmente se lleva la muestra al microscopio y se observa; si la muestra se presenta de color moradason Gram positivas, pero si se presenta de color rosa, rojo o grosella son Gram negativas, pero todo depende a como reaccionen a dicha coloración.
RESULTADOS
1. Staphylococcus aureus.
Bactria Grampositiva.
2. Enterobacter.
Bacteria gramnegativa.
3. Pseudomona.
Bacteria gramnegativa.
4. Azospirillium.
Bacteria gramnegativa.CUESTIONARIO
1. Investigue cuáles son las estructuras celulares o moléculas responsables de la tinción simple realizada. De ejemplos de otros colorantes que podrían utilizarse.
La estructura celular responsable de la coloración es la pared celular de las bacterias, que posee componentes con carga negativa que atraen y enlazan el cromógeno con carga positiva.
En la tinción simple se utilizan tintescomo safranina, azul de metileno, cristal violeta y carbolfuesina.
2. ¿Por qué se recomienda fijar los frotis de cultivos líquidos con alcohol y no con calor? ¿Por qué se deben poner varias veces muestras del cultivo líquido y sólo una muestra de cultivos sólidos al preparar los frotis?
Porque al fijar dichos frotis con alcohol se esteriliza los cultivos, pero si lo fijáramos con calor...
El estudio de los organismos vivos requiere de aparatos de precisión como lo es el microscopio
El instrumento esencial para el avance en el estudio de la célula ha sido el microscopio; un instrumento mecánico óptico que permite ver objetos muy pequeños “más grandes”.
El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con el microscopioóptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea. El modo más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes.
Si se desea simplemente aumentar el contraste de las células para la microscopía, son suficientes los procedimientos que usan un solo colorante llamados de tinción simple. Sin embargo, a menudo se utilizan métodos que no tiñende igual modo todas las células, es el proceso denominado tinción diferencial. Uno muy usado en microbiología es la tinción Gram. Basándose en su reacción a la tinción Gram, las bacterías pueden dividirse en dos grupos: grampositivas y gramnegativas. Esta tinción tiene gran importancia en taxonomía bacteriana ya que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias.OBJETIVO
Que el alumno aprenda las técnicas de preparación de frotis, de fijación y coloración más utilizadas en el estudio microscópico de cultivos bacterianos, obtenidos de medios sólidos y líquidos. Que identifique las principales formas bacterianas y la importancia de las tinciones simples en la caracterización morfológica de estos microorganismos.
MATERIALES
1 mechero.
1 asa desiembra.
5 Portaobjetos.
Piceta con agua destilada esteril.
Microscopio de campo claro.
SUSTANCIAS
Alcohol etílico.
Aceite de inmersión.
Cultivos bacterianos
Muestra biológica
PROCEDIMIENTO
1. Lavar cada uno de los portaobjetos, secarlos y nombrarlos.
2. Flamear el asa de siembra para esterilizarla.
3. Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetolimpio.
4. Tomar una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua.
5. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida.
6. Acercar el portaobjetos con la muestra hacia la llama del mechero para secar y fijar la muestra.
7. Llevar la muestra hacia un ambiente previamente desinfectado.8. Agregar unas gotas de Violeta de genciana y dejar reposar 2 minutos.
9. Limpiar el exceso de colorante, lavándolo con agua destilada estéril y repetir el procedimiento con los 3 colorantes de Gram restantes.
10. Repetir el paso 8 y 9 para las demás muestras a observar y analizar.
11. Finalmente se lleva la muestra al microscopio y se observa; si la muestra se presenta de color moradason Gram positivas, pero si se presenta de color rosa, rojo o grosella son Gram negativas, pero todo depende a como reaccionen a dicha coloración.
RESULTADOS
1. Staphylococcus aureus.
Bactria Grampositiva.
2. Enterobacter.
Bacteria gramnegativa.
3. Pseudomona.
Bacteria gramnegativa.
4. Azospirillium.
Bacteria gramnegativa.CUESTIONARIO
1. Investigue cuáles son las estructuras celulares o moléculas responsables de la tinción simple realizada. De ejemplos de otros colorantes que podrían utilizarse.
La estructura celular responsable de la coloración es la pared celular de las bacterias, que posee componentes con carga negativa que atraen y enlazan el cromógeno con carga positiva.
En la tinción simple se utilizan tintescomo safranina, azul de metileno, cristal violeta y carbolfuesina.
2. ¿Por qué se recomienda fijar los frotis de cultivos líquidos con alcohol y no con calor? ¿Por qué se deben poner varias veces muestras del cultivo líquido y sólo una muestra de cultivos sólidos al preparar los frotis?
Porque al fijar dichos frotis con alcohol se esteriliza los cultivos, pero si lo fijáramos con calor...
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