Microscopia

Práctica N° 1


MICROSCOPÍA – MEDICIÓN DE ESTRUCTURAS MICROSCÓPICAS
Blgo. Walter Fernando Manya Agurto




INTRODUCCIÓN:
Hay 3 grandes problemas que dificultan la observación de estructuras biológicas microscópicas:
1) Las pequeñas dimensiones de las células y sus organelas.
2) Su transparencia a la luz visible; lo cual origina la falta decontraste entre las
diferentes estructuras y entre éstas y el medio que los rodea.
3) Su falta de estabilidad en el tiempo.
Para superar el primer problema se inventaron, construyeron y perfeccionaron microscopios capaces de aumentar significativamente las imágenes revelando los pormenores de las estructuras.
Para resolver el segundo problema, se desarrollarontécnicas de coloración y tinción, que permiten aumentar el contraste entre las diferentes estructuras y entre ellas y su entorno haciéndolas claramente visibles y diferenciables.

La estabilidad y preservación de las estructuras biológicas llevó al desarrollo de técnicas de deshidratación, fijación e inclusión que nos permiten tener muestras permanentes.

Todo esto dio origen aldesarrollo de disciplinas como la Citología, la Histología, la Microscopía, etc.


MICROSCOPIO.- Es un instrumento óptico que nos permite observa una imagen amplificada de un objeto pequeño; siempre y cuando sus dimensiones estén dentro del límite de resolución del microscopio.
La cantidad de detalles que puede registrar un sistema óptico depende de la naturaleza ondulatoria de la luz.Como se aprecia en la Figura 1; si P es un punto luminoso que irradia ondas luminosas en todas las direcciones; éstas llevan información del punto P, pero solo una fracción de ellas es captada por la lente AB y son utilizadas para formar la imagen P1 del punto P. Es por esta razón que ni el mejor instrumento óptico conocido puede darnos una imagen perfectamente puntual del objeto bajoobservación.
[pic]
APERTURA NUMÉRICA.- Es la expresión numérica de la fracción de ondas luminosas que emitidas por el objeto atraviesan la lente y sirven para formar su imagen.
En la Figura 2 podemos observar que la lente AB recibe un cono de rayos luminosos provenientes del punto P; si 2u es el ángulo de este cono, la expresión:












Donde:AN = Apertura numérica
n = Índice de refracción del medio entre el punto P y la lente
Sen u = Seno del ángulo de apertura


mide la cantidad de rayos que penetran en la lente y se denomina Apertura Numérica.
Puesto que la función Seno está definida en el intervalo [-1 , 1] entonces el Sen u no puede ser mayor de 1, y dado que el índice derefracción de los mejores medios ópticos conocidos no es mayor de 1.6; usando aceite de inmersión, podemos deducir que la máxima Apertura Numérica que puede lograrse en una lente es de 1.4.
La Apertura Numérica es una constante óptica para cualquier lente y determina la capacidad de la lente para dar detalles finos del objeto observado.
Su valor está grabado en las lentes objetivo.[pic]


PODER DE RESOLUCIÓN.- Es la capacidad del sistema óptico que nos permite distinguir 2 puntos situados uno muy cerca del otro como si fueran unidades independientes y por lo tanto formando imágenes separadas.
Dos puntos forman imágenes separadas entre sí siempre y cuando entre ellos exista una distancia mínima.


LÍMITE DE RESOLUCIÓN.- Es la distanciamínima que debe existir entre 2 puntos para que puedan ser visualizados como entidades independientes.
Si la distancia que separa a los 2 puntos es menor que el límite de resolución, formarán una sola imagen es decir, sus imágenes se superponen.


Ejemplo: El límite de resolución del ojo humano es de 0.1mm por lo que, 2 puntos separados por una distancia menor a 0.1 mm (100 micras)...