Microscopio De Interferencia

En 1952, Georges Nomarski (1919-1997), un físico polaco, inventa y patenta el sistema de contraste interferencial que llevara su nombre, el cual hoy en día es utilizado mucho para estudiar la morfología de especímenes biológicos y muestras sin teñir. George Nomarski basó su trabajo, o al menos una parte de él, en la prisma de Wollaston. Siguiendo los pasos de Fritz Zernicke, mejoró la microscopiade contraste de fases, mejorando el método para detectar gradientes ópticos en muestras transparentes y convertirlas en diferencias de intensidades.
La microscopia de interferencia diferencial de Nomarski, aprovecha estos efectos de interferencia, para crear una imagen de la estructura celular viva, nítida y seudo-tridimensional.
El microscopio de interferencia contiene las partes típicas decualquier otro microscopio óptico, es decir cuenta con una fuente luminosa, oculares, objetivos, diafragma, condensador, base, etc., pero lo que distingue al microscopio de Nomarski es que este, a diferencia de otros, con tiene dos prismas, las cuales ayudan en cuanto a la creación de la imagen semi-tridimensional final. Estos prismas, llamadas prismas de Nomarski, son versiones modificadas de losprismas de Wollaston.
Figura 1
Figura 1. En la primera imagen se observa cómo se dividen los rayos polarizados en la prisma de Wollaston, en la segunda se ve como en la prisma de Nomarski, los rayos se encuentran en un punto focal externo.
La prisma de Wollaston consta de dos triángulos rectángulos perpendiculares entre sí, y juntados en sus hipotenusas (como se le muestra en la figura 1) unidasgeneralmente con bálsamo de Canadá (resina del árbol abeto de bálsamo), los cuales separan la luz polarizada o no polarizada en dos rayos polarizados perpendiculares. Estos prismas generalmente son de calcita o de cuarzo. Las modificaciones hechas por Nomarski constan de unos cortes hechos al prisma que tienen como resultado que el eje óptico quede ligeramente orientado a la superficie plana, loque causa que los rayos salgan a diferentes ángulos que los de la prisma de Wollaston, lo que permite que se pueda enfocar el prisma cuando se ajuste el microscopio.
Una diferencia notable que tiene el DIC con otros microscopios ópticos surge del condensador. Normalmente el condensador tiene la función de concentrar los rayos luminosos sobre la muestra, en el microscopio de Nomarski, elcondensador enfoca los dos rayos de luz para que estos pasen a través de la muestra. Se enfocan los dos rayos de tal manera que estos pasan por dos puntos adyacentes a la muestra, separados por una distancia de alrededor de 0.2 μm.
Otra de las variaciones en cuanto a las partes que tiene el microscopio de interferencia a diferencia de un microscopio óptico, es que en el microscopio de interferencia deNomarski se utilizan dos filtros especiales llamados filtro polarizador plano y filtro analizador. El primero polariza el rayo de luz incidente que proviene de la lámpara en uno solo y con una misma longitud mientras que el filtro analizador o polarizador tiene la función de recombinar los rayos de luz, para producir la imagen seudo-tridimensional observada a través del ocular.
El sistema ópticodel DIC funciona, básicamente, de la siguiente forma: se utiliza luz blanca polarizada por el filtro plano, este rayo de luz monocromático incide en el condensador completamente abierto (el cual a diferencia de otros microscopios, no concentra el rayo de luz y lo deja salir de la misma manera que entro) y el prisma de Nomarski birrefringente que se encuentra dentro de él, genera dos rayos de luzparalelos, uno incide sobre la muestra a analizar y el segundo pasa en forma paralela sobre la muestra.
Los espacios laterales de las dos ondas se miden en términos de micrómetros y no se exceden en el tamaño de la resolución perceptible al ojo humano, logrando así que no se presente una doble imagen al observador, sino una apariencia seudo-tridimensional del objeto estudiado sobre un fondo...