Microscopio

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CAPÍTULO

Técnicas en biología
celular y molecular
18.1 El microscopio óptico
18.2 Microscopia electrónica
de transmisión
18.3 Microscopia electrónica de barrido
y microscopia de fuerza atómica
18.4 El uso de radioisótopos
18.5 Cultivo celular
18.6 Fraccionamiento del contenido
de una célula mediante
centrifugación diferencial
18.7 Aislamiento, purificación
y fraccionamientode proteínas
18.8 Identificación de la estructura
de proteínas y complejos
multisubunitarios
18.9 Purificación de ácidos nucleicos
18.10 Fraccionamiento de ácidos nucleicos
18.11 Hibridación de ácido nucleico
18.12 Síntesis química de DNA
18.13 Tecnología de DNA recombinante
18.14 Amplificación enzimática de DNA
por PCR
18.15 Secuenciación de DNA
18.16 Genotecas de DNA
18.17Transferencia de DNA a células
eucariotas y embriones de mamífero
18.18 Determinación de la función de genes
eucariotas por eliminación génica
18.19 Uso de anticuerpos

A

causa del tamaño tan pequeño del tema de estudio, la biología celular y
molecular depende más del desarrollo de nuevos instrumentos y tecnologías
que cualquier otra rama de la biología. Por consiguiente, es difícil aprenderacerca de la biología celular y molecular sin aprender también respecto a la tecnología
que se requiere para reunir datos. En este capítulo se revisan los métodos que se
emplean más a menudo en este campo sin profundizar mucho en los detalles y variaciones que se usan. Los objetivos de este capítulo son: describir las formas en que se
utilizan las diversas técnicas y presentar ejemplos de lostipos de información que
pueden obtenerse mediante estas técnicas. Se comienza con el instrumento que permitió a los biólogos descubrir la existencia de células, con lo que se establece un
punto de partida para toda la información que se presenta en este libro. ●

Uso de la fluorescencia de doble marca para seguir los acontecimientos dinámicos dentro de organelos celulares. Las cisternas de Golgide una célula de levadura en gemación no se organizan en pilas bien definidas
como en la mayoría de las células eucariotas, sino que están dispersas en el citoplasma. Cada una de las
estructuras ovaladas intensamente coloreadas es una cisterna individual, en la que el color se debe a la
localización de moléculas de proteína con tinción fluorescente. Las cisternas de color verde contienen unaproteína marcada con GFP (Vrg4) que interviene en las actividades iniciales del aparato de Golgi, mientras que las cisternas de color rojo contienen una proteína marcada con DsRed (Sec7) que participa en
actividades tardías de dicho complejo. Esta serie de micrografías revela la composición proteínica de cisternas individuales durante un lapso aproximado de 13 min (el tiempo transcurrido se indicaen el ángulo
inferior izquierdo). La punta de flecha y la flecha señalan dos de estas cisternas todo el tiempo. Estas dos
cisternas se automicrografiaron en las filas inferiores de micrografías. En esta serie se aprecia que la composición proteínica de una cisterna individual cambia con el tiempo de una con proteínas de Golgi “tempranas”
(verde) a otra con proteínas de Golgi “tardías” (rojo). Estosdescubrimientos dan apoyo visual directo al
modelo de maduración de las cisternas que se analiza en la página 296. (Reimpresa con autorización
de Eugene Losev, et al., cortesía de Benjamin S. Glick; Nature 441:1004, 2006; © 2006,
Macmillan Magazines Ltd.)

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Capítulo 18

TÉCNICAS EN BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR

18.1 EL MICROSCOPIO ÓPTICO
Los microscopios son instrumentosque producen una
imagen aumentada de un objeto. La figura 18-1 muestra los
componentes principales de un microscopio óptico compuesto.
Una fuente de luz, que puede ser externa al microscopio o estar
incluida en su base, ilumina la muestra. La lente condensadora
subyacente reúne los rayos difusos de la fuente de luz e ilumina
el espécimen con un pequeño cono de luz brillante que permite
ver...