Mitosis

OBSERVACION DE LA MITOSIS EN CÉLULAS MERISTEMÁTICAS
DE RAÍZ DE CEBOLLA (Allium cepa)
CON EL MICROSCOPIO DE FUERZA ATÓMICA
Cruz-Gómez, Sarai de Jesúsa,*; Segura-Valdez, María de Lourdesb,*;
Jiménez-García, Luis Felipec,*.
*Laboratorio de Nanobiología Celular, Departamento de Biología Celular, Facultad de Ciencias, UNAM. Circuito
Exterior, Ciudad Universitaria, Coyoacán 04510, México D.F.,México.a Tesista, Licenciatura en Biología, b Doctora, Profesor de Asignatura Ordinario B, Profesor Ordinario de CarreraTitular A T.C., c Doctor, Profesor de Asignatura Ordinario B, Profesor Ordinario de Carrera Titular C T.C.,Teléfono: (55) 5622-5396 sarichuy@yahoo.com.mx
Introducción
Para la comprensión del sustrato celular de la herencia, es preciso analizar los mecanismos reguladores deeventos bioquímicos secuenciales y continuos en la célula [1]. De igual forma para conocer lo que sucede en la célula durante la mitosis es preciso delimitar la trayectoria de los eventos que se llevan a cabo dentro de ella. Este trabajo comprende una visión diferente a las anteriores de un proceso fundamental sucedido en todos los organismos eucariontes para generar nuevas células y nuevosorganismos; el de la mitosis [2]. Aunque el proceso de división celular ha sido caracterizado desde hace muchos años atrás en diversos tipos celulares, con diferentes técnicas y con diferentes instrumentos; en los resultados de este trabajo se muestran imágenes obtenidas in situ [3-5]con el Microscopio de Fuerza Atómica de células de raíz de cebolla en división celular.
En la elaboración de este trabajoprincipalmente se usó el Microscopio de Fuerza Atómica [6], un instrumento que en las ciencias biológicas tiene tan sólo algunos años en haberse empezado a usar, su mecanismo permite obtener imágenes reales y en tercera dimensión de la muestra en estudio además de ofrecer una resolución mayor al Microscopio Electrónico de Transmisión [7]. En el AFM una aguja “barre” el relieve de la muestra y pormedio de un programa de cómputo lo transforma en una observación que puede ser interpretada como una imagen en tercera dimensión. La muestra referida es un corte muy delgado (0.2 μm) de la punta de una raíz de cebolla que fue procesada con la técnica convencional de microscopía electrónica [8].
Objetivo
Observar y reconocer estructuras celulares correspondientes a las etapas de la mitosis encélulas meristemáticas de la raíz de cebolla (Allium cepa) con el microscopio de fuerza atómica. Analizar si el microscopio de fuerza atómica permite resolver estructuras celulares involucradas en la expresión fenotípica de la división celular.
Metodología
Se utilizaron meristemos de raíces de cebolla obtenidos a partir de crecimiento de cebollas en agua, durante 3 a 4días, a temperatura ambiente[9]. Las muestras se procesaron de acuerdo con técnicas estándar para microscopía electrónica, se tomaron los meristemos de la raíz de cebolla y se fijaron con glutaraldehído al 6% en amortiguador PBS a pH 7.2 durante 16 horas. Las muestras después se lavaron con PBS y se postfijaron con tetra óxido de osmio al1% durante varias horas. Posteriormente se enjuagaron y se deshidrataron en una seriede etanol a concentraciones graduales, finalizando con óxido de propileno. La pre inclusión se llevó a cabo con una mezcla de óxido de propileno y resina epóxica, en proporción 1:1 durante 16 horas. Finalmente las muestras se incluyeron en resina epóxica durante 16 horas a 60oC. Se obtuvieron cortes semi finos de unos 200 nm de espesor, con una cuchilla de vidrio y utilizando un ultra micrótomomarca Leica, modelo Ultra cut. Los cortes se montaron al calor sobre portaobjetos de vidrio y se tiñeron con azul de toluidina. Otros cortes se montaron sobre portaobjetos y no fueron teñidos. Los cortes semifijos teñidos o sin teñir se observaron con un microscopio de fuerza atómica modelo BIOS cope (Digital Instruments, Santa Bárbara CA, USA) operando en modo de contacto y zapping con un...