modulos 2

.En este laboratorio realizamos distintos pasos para obtener los resultados de la reacción de polímeros en cadenas (PCR). Luego de realizar el módulo I las muestras se colocaron a -20°C para poderser utilizadas en este módulo. Realizamos las siguientes pruebas para obtener los resultados del módulo II: se amplio el gen 16SrRNA mediante PCR, analizamos los resultados de PCR de 16SrRNA mediantegel de electroforesis y realizamos la purificación del producto de PCR. Esta imagen muestra el resultado de este módulo el cual como podemos ver no hay ninguna corrida de las bandas y esto nos dejaclaro que hubo un error al realizar el laboratorio. En este caso el error fue que hay mucha concentración de DNA y poca concentración de los primers en el master mix. Esto se podría resolver de manera quediluyamos la muestra de DNA. No obstante existen otros factores que afectan los resultados de PCR. Algunos de estos son:
a) Termociclador. No todas las máquinas del mercado son igualmente eficientesa la hora de amplificar DNA. En principio, cada modelo requiere unas condiciones propias y una optimización empírica, dependiendo incluso de la secuencia que se desee amplificar y de la pureza delmaterial empleado. Por ello, resulta ventajoso en general adquirir un equipo que esté soportado por protocolos y técnicas desarrolladas por la empresa fabricante.
b) Pureza del DNA. Las DNApolimerasas empleadas en PCR pueden ser inhibidas por diversas sustancias presentes en el material a amplificar. Éstas pueden derivar del organismo del que procede el DNA, o bien de los reactivos utilizadospara su aislamiento. Por ello, puede ser aconsejable en determinados casos amplificar DNA a partir de células o tejidos, mientras que en otros casos es necesaria una purificación previa de los ácidosnucleicos.
c) Otros reactivos. Los demás reactivos (incluyendo el agua) deben ser de suficiente pureza y —sobre todo— carentes de inhibidores de la DNA polimerasa que se esté empleando en la...