Mohos y levaduras

MOHOS Y LEVADURAS

Los mohos y levaduras son fácilmente encontrados en alimentos. La selectividad de estos medios se logra ya sea por disminución de pH a valores bajo 4 o por adición de antibióticos tales como penicilina + estreptomicina, cloranfenicol, clortetraciclina, oxitetraciclina o gentamicina.

1.- OBJETIVOS
.- Determinar el número de mohos y levaduras en un alimento determinado
.-Montar preparación de hongos para su observación al microscopio
.- Reconocer y diferenciar macroscópica y microscópicamente levaduras y hongos filamentosos
.- Identificar diferentes estructuras de tipo reproductivo en levaduras y hongos filamentosos

2.- MATERIALES
.- Estufa de incubación, balanza, pipetas graduadas, mecheros, gradillas, erlenmeyer, tubos de ensayo, placas Petri, medios decultivo.

3.- PROCEDIMIENTO
.- Pesar asépticamente 10 gr de la muestra de alimento y homogeneizarla en 90 ml de solución reguladora de peptona 15 segundos, obteniendo así la dilución 10-1

.- Traspasar 1 ml de la dilución 10-1 a un tubo que contiene 9 ml de solución diluyente, pipetear 8 a 10 veces de tal manera que quede bien homogeneizado, obteniendo así la dilución 10-2 , repetir estaoperación para preparar las diluciones decimales consecutivas hasta 10-4, siempre trabajar cerca del mechero.

.- Sembrar 1 ml en duplicado en placas Petri que se encuentran estériles, de las diluciones 10-1 a 10-4

.- Agregar a cada una de las placas aproximadamente 15 ml de agar fundido y temperado a 45º C

.- Mezclar el inóculo con el agar fundido realizando movimientos en forma de ochosobre el mesón de trabajo, cuidadosamente.

.- Una vez solidificado el agar, incubar sin invertir a 25º C durante 5 días.

.- Después del periodo de incubación seleccionar las placas que contengan entre 10 y 150 colonias. Si sólo se dispone de placas con menos de 20 colonias, utilizar dichas placas.

.- Contar las colonias de mohos que se presentan bajo una forma filamentosa característica(micelio) y de color variable.

.- Contar por separado las colonias de levaduras. Se presentan en forma de colonias cremosas, blancas o coloreadas.

.- Registrar por separado el número de colonias de mohos y levaduras, respectivamente, y el factor de dilución correspondiente.

Las esporas de los mohos se dispersan con gran facilidad, por lo tanto, es necesario manipular cuidadosamente las placasPetri, para evitar la contaminación del área de trabajo.

4.- TINCIÓN DE MOHOS Y LEVADURAS
.- Sobre un portaobjeto limpio deposite una gota de azul de lactofenol, sobre ésta agregue la colonia de mohos o levaduras a observar, la que debe ser tomada cuidadosamente con un alfiler desde la placa donde se encuentra.
.- Cubra la preparación anterior con cubreobjetos.
.- Observe primero con elobjeto de 10x y luego con el de 40x, con el cual debe distinguir las estructuras reproductivas.

5.- CALCULO Y EXPRESIÓN DE RESULTADOS
.- El recuento de mohos y/o levaduras se calcula multiplicando el promedio de los recuentos de 2 placas de la misma dilución por el factor de dilución correspondiente.
En el caso que 2 diluciones consecutivas se encuentren dentro del rango de selección,emplear la siguiente fórmula:
N = Sumatoria del número de colonias
((0.1 x n1) + (1.0 x n2)) x Factor de dilución

Informar por separado el recuento de mohos y levaduras en colonias /gr o ml, según corresponda.

MICOTOXINAS

Sustancias toxicas producidas por diferentes hongos bajo condiciones favorables, contaminantes químicos de origen biológico, que pueden encontrarseen cualquier sustrato donde se desarrollen hongos.

Micotoxicosis: Enfermedades producidas al ingerirse alimentos contaminados con micotoxinas.

Hongos principalmente involucrados :
.- Aspergillus
.- Penicillum
.- Fusarium

CARACTERISTICAS PRINCIPALES DE LAS MICOTOXINAS

.- Estructuras y propiedades variables
.- La gran mayoría son relativamente termoestables
.- Forman compuestos no...