Monografia ensayo cometa
Páginas: 19 (4528 palabras)
Publicado: 9 de septiembre de 2012
Análisis del Ensayo cometa técnicas de reconocimiento de daño en el ADN a nivel celular espermático.
Introducción
El ensayo cometa, originalmente establecido por Ostling y Johanson, es un ensayo de uso frecuente para detectar daño tanto en cadena simple, así como roturas de doble cadena de ADN a nivel de células individuales (Ostling O, Johanson KJ.1984)
El ensayo cometa es adecuado parauna amplia gama de aplicaciones, incluyendo la influencia de la genotoxicidad (Nousis L. 2005.) o daño de ADN debido a las especies reactivas de oxígeno (Schraml E.2009).
La prueba del ensayo cometa mantiene su posición, al menos para fines de selección, porque es un procedimiento muy eficiente además de simple, es una metodología rápida y económica( Robert Fuchs.2011).
Laelectroforesis en gel de células individuales o Ensayo Cometa, es muy habitualmente usada para evaluar el daño en el ADN de las células normalmente por la exposición de agentes nocivos. En la mayoría de estudios, los linfocitos de sangre periférica son utilizados como modelo celular.( Rodrigo A.2005)
Es una técnica particularmente valiosa y permite la detección de diferencias intercelulares en el ADN dañadoy reparación en cualquier población celular eucariótica que puede ser obtenido como una suspensión celular de 100.000 células.( Vanessa Ramírez y Patricia Cuenca.2002)
Su sencillez y relativo bajo costo lo convierte en una excelente herramienta para el estudio de las células con daño en el ADN principalmente en mamíferos.
Es por ello que este documento busca hacer un análisis detallado delensayo cometa así como sus usos, especificación y metodologías existentes como una breve descripción de algunos programas computacionales que simplifican y permiten el análisis de resultados de dicho ensayo.
Objetivo general
Presentar las diversas metodologías del ensayo cometa para determinar el daño al ADN de la célula espermática.
objetivos particulares1.-investigar la metodología de
A)ensayo cometa sencillo
b)ensayo cometa de doble cola
c)importancia del software para la interpretación de resultados.
HIPÓTESIS
¿El ensayo cometa si puede ser utilizado como una herramienta eficaz, sencilla y de bajo costo comparado con otras técnicas (por determinar) para conocer el daño en ADN dentro de la célula.?
justificación
Laimportancia de hacer una monografía sobre el ensayo cometa radica en conocer por medio de esta técnica el daño causado al ADN en células específicamente al espermatozoide por acción de agentes externos a los cuales el individuo es expuesto, esto además de que la técnica es sencilla y relativamente poco costosa a comparación de otros métodos sin perder confiabilidad en los resultados.Marco teórico
Existen una gran variedad de bioensayos útiles para evaluar genotoxicidad, entre
ellos se encuentra el de electroforesis unicelular en gel, llamado comúnmente ensayo
cometa, el cual es un método microscópico fluorescente rápido y muy sensible, que
permite examinar el daño al ADN en células de forma individual, este ensayo tiene
importantes aplicaciones en elcampo de la genotoxicidad por lo que puede emplearse
también en ensayos de antigenotoxicidad.( Hernández-Guevara y col.2006)
Aunque existen diversas metodologías para la medición del daño oxidativo en el DNA (GC-MS, HPLC, HPLC-EC) (Ravanat et al., 1995; Nakajima et al., 1996; Helbock et al., 1998; Hofer y Möller, 1998), la mayoría conducen a una sobreestimación del daño, debido a la oxidaciónde la muestra durante el aislamiento y manipulación del material. Así, el ensayo del cometa parece ser un método muy apropiado para medir este tipo de daño
(Collins et al., 1997)
Además de que el ensayo es totalmente apto para detectar daño genético y su reparación en moléculas de DNA altamente compactadas con eficacia y exactitud, en comparación con otras técnicas...
Introducción
El ensayo cometa, originalmente establecido por Ostling y Johanson, es un ensayo de uso frecuente para detectar daño tanto en cadena simple, así como roturas de doble cadena de ADN a nivel de células individuales (Ostling O, Johanson KJ.1984)
El ensayo cometa es adecuado parauna amplia gama de aplicaciones, incluyendo la influencia de la genotoxicidad (Nousis L. 2005.) o daño de ADN debido a las especies reactivas de oxígeno (Schraml E.2009).
La prueba del ensayo cometa mantiene su posición, al menos para fines de selección, porque es un procedimiento muy eficiente además de simple, es una metodología rápida y económica( Robert Fuchs.2011).
Laelectroforesis en gel de células individuales o Ensayo Cometa, es muy habitualmente usada para evaluar el daño en el ADN de las células normalmente por la exposición de agentes nocivos. En la mayoría de estudios, los linfocitos de sangre periférica son utilizados como modelo celular.( Rodrigo A.2005)
Es una técnica particularmente valiosa y permite la detección de diferencias intercelulares en el ADN dañadoy reparación en cualquier población celular eucariótica que puede ser obtenido como una suspensión celular de 100.000 células.( Vanessa Ramírez y Patricia Cuenca.2002)
Su sencillez y relativo bajo costo lo convierte en una excelente herramienta para el estudio de las células con daño en el ADN principalmente en mamíferos.
Es por ello que este documento busca hacer un análisis detallado delensayo cometa así como sus usos, especificación y metodologías existentes como una breve descripción de algunos programas computacionales que simplifican y permiten el análisis de resultados de dicho ensayo.
Objetivo general
Presentar las diversas metodologías del ensayo cometa para determinar el daño al ADN de la célula espermática.
objetivos particulares1.-investigar la metodología de
A)ensayo cometa sencillo
b)ensayo cometa de doble cola
c)importancia del software para la interpretación de resultados.
HIPÓTESIS
¿El ensayo cometa si puede ser utilizado como una herramienta eficaz, sencilla y de bajo costo comparado con otras técnicas (por determinar) para conocer el daño en ADN dentro de la célula.?
justificación
Laimportancia de hacer una monografía sobre el ensayo cometa radica en conocer por medio de esta técnica el daño causado al ADN en células específicamente al espermatozoide por acción de agentes externos a los cuales el individuo es expuesto, esto además de que la técnica es sencilla y relativamente poco costosa a comparación de otros métodos sin perder confiabilidad en los resultados.Marco teórico
Existen una gran variedad de bioensayos útiles para evaluar genotoxicidad, entre
ellos se encuentra el de electroforesis unicelular en gel, llamado comúnmente ensayo
cometa, el cual es un método microscópico fluorescente rápido y muy sensible, que
permite examinar el daño al ADN en células de forma individual, este ensayo tiene
importantes aplicaciones en elcampo de la genotoxicidad por lo que puede emplearse
también en ensayos de antigenotoxicidad.( Hernández-Guevara y col.2006)
Aunque existen diversas metodologías para la medición del daño oxidativo en el DNA (GC-MS, HPLC, HPLC-EC) (Ravanat et al., 1995; Nakajima et al., 1996; Helbock et al., 1998; Hofer y Möller, 1998), la mayoría conducen a una sobreestimación del daño, debido a la oxidaciónde la muestra durante el aislamiento y manipulación del material. Así, el ensayo del cometa parece ser un método muy apropiado para medir este tipo de daño
(Collins et al., 1997)
Además de que el ensayo es totalmente apto para detectar daño genético y su reparación en moléculas de DNA altamente compactadas con eficacia y exactitud, en comparación con otras técnicas...
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