Morfogenesis In VitroBeatriz Soriano Vicente

UNIVERSIDAD DE ALMERÍA
ESCUELA SUPERIOR DE INGENIERÍA
DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA VEGETAL Y ECOLOGÍA

TITULACIÓN DE INGENIERÍA TÉCNICA AGRÍCOLA
HORTOFRUTICULTURA Y JARDINERÍA

MORFOGÉNESIS IN VITRO Y
OBTENCIÓN DE PLANTAS TRANSGÉNICAS DE
MELÓN (Cucumis melo L.)

ALUMNA:

TUTORA:

Beatriz Soriano Vicente

Dra. María Trinidad Angosto Trillo

ALMERIA, MAYO DE 2012

Morfogénesis in vitro y obtención deplantas transgénicas de melón
Indice
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ÍNDICE
1.INTERÉS Y OBJETIVOS……………………………………………………………………………….….2
2.REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA………………………………………………………………………………6
2.1.EL MELÓN (Cucumis melo L.)………………………………………………………………6
2.1.1.DESCRIPCIÓN BOTÁNICA Y ORIGEN……………………………………...….6
2.1.2.DESCRIPCIÓNMORFOLÓGICA……………………………………………………..7
2.1.3.TIPOS VARIETALES……………………………………………………………………..8
2.2.CULTIVO DEL MELÓN………………………………………………………………………….11
2.3.COMERCIALIZACIÓN E IMPORTANCIA ECONÓMICA DEL CULTIVO
DEL MELÓN………………………………………………………………………………………….12
2.4.MEJORA GENÉTICA DEL MELÓN…………………………………………………………18
2.4.1.EL CARÁCTER “LARGA VIDA” EN MELÓN……………………………..…18
2.4.2.RESISTENCIAS A ESTRESES BIÓTICOS……………………………………….21
2.4.3.RESISTENCIAS A ESTRESESABIÓTICOS…………………………………….22
2.4.4.OBTENCIÓN DE HAPLOIDES (H) Y DOBLE HAPLOIDES (DH)…….23
2.5.CULTIVO IN VITRO Y ALTERNATIVAS BIOTECNOLÓGICAS EN LA
MEJORA DEL MELÓN……………………………………………………………………………24
2.5.1.REGENERACIÓN DE PLANTAS MEDIANTE CULTIVO DE
CÉLULAS Y TEJIDOS VEGETALES……………………………………………24
• Regeneración in vitro a partir de yemas preexistentes
• Regeneración

adventicia

mediante

cultivo

de

explantes primarios
2.5.2.TRANSFORMACIÓNGENETICA………………………………………………….25
• Estructura
Agrobacterium.

Beatriz Soriano Vicente

y

mecanismo

de

infección

de

Morfogénesis in vitro y obtención de plantas transgénicas de melón
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• Transformación genética de plantas mediada por
Agrobacterium
• Estrategias

de

transferencia

de

genes

en

Cucurbitáceas
•Transformación genética y mejora en melón
3.MATERIAL Y MÉTODOS…………………………………………………………………………………40
3.1.MATERIAL VEGETAL……………………………………………………………………………40
3.2.SOLUCIONES MINERALES Y MEDIOS DE CULTIVO………………………………41
• Solución mineral MS (Murashige y Skoog, 1962)
• Medio de germinación (MG)
• Medios de inducción de organogénesis (MIO)
• Medio de crecimiento de Agrobacterium tumefaciens (LB)
• Medio de lavado(ML)
• Medio de enraizamiento (ME)
3.3.TÉCNICAS BÁSICAS DE CULTIVO………………………………………………………..42
3.3.1.ESTERILIZACIÓN DE SEMILLAS………………………………………………….42
3.3.2.OBTENCIÓN DE PLANTAS AXÉNICAS………………………………………..42
3.3.3.OBTENCIÓN DE EXPLANTES DE COTILEDÓN A PARTIR DE
PLÁNTULAS AXÉNICAS…………………………………………………………….42
3.3.4.CULTIVO DE EXPLANTES PRIMARIOS……………………………………….43
3.3.5.OBTENCIÓN DE PLANTAS AXÉNICAS PORCULTIVO DE
ÁPICES MERISTEMÁTICOS…………………………………………………………43
3.3.6.REGENERACIÓN DE PLANTAS A PARTIR DE EXPLANTES…………43
3.3.7.PROPAGACIÓN CLONAL DE PLANTAS………………………………………44
3.4.TRANSFORMACIÓN GENÉTICA……………………………………………………………45
3.4.1.PREPARACIÓN DEL CULTIVO BACTERIANO PARA LA
TRANSFORMACIÓN………………………………………………………………….45

Beatriz Soriano Vicente

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3.4.2.MÉTODO DE TRANSFORMACIÓN: SELECCIÓN Y
REGENERACIÓN DE PLANTAS TRANSGÉNICAS……………………….46
3.5.ANÁLISIS DEL NIVEL DE PLOIDIA……………………………………………………….47
3.6.ANÁLISIS

DEL

NIVEL

DE

RESISTENCIA

A

KANAMICINA

EN

TRANSFORMANTES PRIMARIOS…………………………………………………………….….48
3.7. ANÁLISIS DE LA EXPRESIÓN DEL GENDELATOR UidA…………………….48
4.RESULTADOS Y DISCUSIÓN………………………………………………………………………….50
4.1.CRECIMIENTO Y APTITUD ORGANOGÉNICA EN EXPLANTES
PRIMARIOS DE MELÓN…………………………………………………………………………50
4.1.1.EFECTO DEL CULTIVAR Y DEL MEDIO DE INDUCCIÓN
SOBRE EL CRECIMIENTO EN EXPLANTES PRIMARIOS……………51
4.1.2.EFECTO DEL CULTIVAR Y DEL MEDIO DE INDUCCIÓN...