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Programa de PCR: "RT-Roche"
NOTA: para hacer una placa, preparar dos reacciones por cada muestra de RNA (para la réplica)
1. Preparar en los tubos:
- 10 μl RNA (total=1 μg RNA)
- 1 μl Anchored-oligo(dT)18 primer (Vial 5)
- 2 μl Random hexamer primer (Vial 6)
(Volumen total= 13 μl)
Desnaturalizar la mezcla calentando los tubos a 65ºC 10min y pasar a hielo
2. Preparar un mix con lossiguientes componentes por tubo, añadiéndolos en el orden:
- 4 μl Transcriptor Reverse Transcriptase Reaction Buffer 5X (Vial 2)
- 0.5 μl Protector RNase Inhibitor (Vial 3)
- 2 μl Deoxynucleotide Mix (Vial 4)
- 0.5 μl Transcriptor Reverse Transcriptase (Vial 1)
(Añadir 7 μl a cada tubo, Volumen final= 20 μl)
Mezclar suavemente y dar un spin
3. En el termociclador: 25ºC 10 min55ºC 30min
85ºC 5 min (inactivación del Transcriptor Reverse Transcriptase)
4. Parar la reacción poniendo los tubos en hielo
5. Mezclar cada tubo con su réplica y repartir el contenido total en dos tubos (para homogeneizar), y medir la concentración co Nanodrop

(Conservar a -80ºC)

Programa de PCR: "RT-Roche"
NOTA: para hacer una placa, preparar dos reacciones por cada muestra deRNA (para la réplica)
1. Preparar en los tubos:
- 10 μl RNA (total=1 μg RNA)
- 1 μl Anchored-oligo(dT)18 primer (Vial 5)
- 2 μl Random hexamer primer (Vial 6)
(Volumen total= 13 μl)
Desnaturalizar la mezcla calentando los tubos a 65ºC 10min y pasar a hielo
2. Preparar un mix con los siguientes componentes por tubo, añadiéndolos en el orden:
- 4 μl Transcriptor Reverse TranscriptaseReaction Buffer 5X (Vial 2)
- 0.5 μl Protector RNase Inhibitor (Vial 3)
- 2 μl Deoxynucleotide Mix (Vial 4)
- 0.5 μl Transcriptor Reverse Transcriptase (Vial 1)
(Añadir 7 μl a cada tubo, Volumen final= 20 μl)
Mezclar suavemente y dar un spin
3. En el termociclador: 25ºC 10 min
55ºC 30min
85ºC 5 min (inactivación del Transcriptor Reverse Transcriptase)
4. Parar lareacción poniendo los tubos en hielo
5. Mezclar cada tubo con su réplica y repartir el contenido total en dos tubos (para homogeneizar), y medir la concentración co Nanodrop

(Conservar a -80ºC)
Programa de PCR: "RT-Roche"
NOTA: para hacer una placa, preparar dos reacciones por cada muestra de RNA (para la réplica)
1. Preparar en los tubos:
- 10 μl RNA (total=1 μg RNA)
- 1 μlAnchored-oligo(dT)18 primer (Vial 5)
- 2 μl Random hexamer primer (Vial 6)
(Volumen total= 13 μl)
Desnaturalizar la mezcla calentando los tubos a 65ºC 10min y pasar a hielo
2. Preparar un mix con los siguientes componentes por tubo, añadiéndolos en el orden:
- 4 μl Transcriptor Reverse Transcriptase Reaction Buffer 5X (Vial 2)
- 0.5 μl Protector RNase Inhibitor (Vial 3)
- 2 μl Deoxynucleotide Mix(Vial 4)
- 0.5 μl Transcriptor Reverse Transcriptase (Vial 1)
(Añadir 7 μl a cada tubo, Volumen final= 20 μl)
Mezclar suavemente y dar un spin
3. En el termociclador: 25ºC 10 min
55ºC 30min
85ºC 5 min (inactivación del Transcriptor Reverse Transcriptase)
4. Parar la reacción poniendo los tubos en hielo
5. Mezclar cada tubo con su réplica y repartir el contenido total en dostubos (para homogeneizar), y medir la concentración co Nanodrop

(Conservar a -80ºC)

Programa de PCR: "RT-Roche"
NOTA: para hacer una placa, preparar dos reacciones por cada muestra de RNA (para la réplica)
1. Preparar en los tubos:
- 10 μl RNA (total=1 μg RNA)
- 1 μl Anchored-oligo(dT)18 primer (Vial 5)
- 2 μl Random hexamer primer (Vial 6)
(Volumen total= 13 μl)
Desnaturalizarla mezcla calentando los tubos a 65ºC 10min y pasar a hielo
2. Preparar un mix con los siguientes componentes por tubo, añadiéndolos en el orden:
- 4 μl Transcriptor Reverse Transcriptase Reaction Buffer 5X (Vial 2)
- 0.5 μl Protector RNase Inhibitor (Vial 3)
- 2 μl Deoxynucleotide Mix (Vial 4)
- 0.5 μl Transcriptor Reverse Transcriptase (Vial 1)
(Añadir 7 μl a cada tubo, Volumen...