Método de Howard

MÉTODO DE HOWARD


Objetivo

Enumerar fragmentos de micelio en muestras de alimentos como purés, jugos, salsas.

Fundamento

El método de Howard se utiliza mucho en la industria para el conteo de filamentos de mohos en ciertos productos como el jugo de tomate. Es un método rápido, casi no se gastan reactivos y es relativamente sencillo de practicarse, solo se requiere de muchaexperiencia para obtener resultados confiables.

Se recomienda estudiar el producto bajo el microscopio antes de contar mohos para familiarizarse con la apariencia del alimento. El puré de tomate puede usarse sin diluir para cuentas de rutina. Se diluye cuando los límites son superiores a un 40 %.

En el caso de cítricos centrifugar 50 ml de jugo por 10 minutos a 2200 r.p.m. decantar, añadir 5 ml depectina u otro agente engrosante y mezclar.

Procedimiento de conteo.

En un portaobjetos se coloca la muestra
Se examina con el microscopio. La cantidad de muestra debe ser de 0.1 ml y debe ocupar un área de 1 cm2. Se cuentan 25 campos en un portaobjetos y 25 en otro. Se comienza en un extremo y se recorre el portaobjetos hasta el otro lado. Un campo es positivo si la longitud del filamentodel moho excede en 1/6 del diámetro del campo.
La cuenta de mohos por el método de Howard es el porcentaje de campos positivos en 2 laminillas con la muestra. La cuenta de un solo portaobjetos no es muy significativa.

Identificación de cuentas de mohos

Su identificación se aprende por experiencia. Si se tiene duda sobre una estructura, no la cuente. Los filamentos de mohos tienen lassiguientes características:
Estructura tubular gruesa.
Paredes dobles paralelas de apariencia similar.
Material interior granulado y a menudo separado en segmentos.
Hifas claras.












Cuestionario

1. -Analice las siguientes muestras: salsa cátsup, puré de tomate, puré de un tomate sano, puré de un tomate podrido, infestado de hongos.

2. -Reporte sus resultados en porcentajes,indique si están dentro de los limites o los rebasan.

3. -Indique cuales son los límites para salsa cátsup, puré de tomate, salsas y sopas.

4.- ¿En qué casos nos puede servir como indicador, el método de Howard? ¿Qué otro tipo de indicadores deben complementar la información?

5.- Explique el método de Howard para jugo de piña, puré de manzanas y arándanos.

6. Explique el método parala cuenta de Geotrichum y en qué casos se utiliza.




3. FUNDAMENTO
El método se basa en la observación directa al microscopio, para identificar las características de los filamentos de hongos.
4. REACTIVOS Y MATERIALES
4.1 Reactivos
Los reactivos que a continuación se mencionan, deben ser grado analítico; cuando se indique agua, debe entenderse agua destilada.
Ácido clorhídricoAlcohol caprílico
Soluciones estabilizadoras. Se prefiere una solución al 0.5 % de carboximetilcelulosa.
Poner 500 cm3 de agua hirviendo en una licuadora, con esta funcionando agregar 2.5 g de carboximetilcelulosa y 10 cm3 de formaldehído (HCHO), homogeneizando por un minuto.
Soluciones alternativas: 3-5% de pectina o 1% de alginato. Tratar la solución con vacío o calor para remover las burbujas deaire. Agregar 2 cm3 de formaldehído (HCHO) por cada 100 cm3 de solución, como preservativo. Ajustar el ph a 7 - 7. 5.
4.2 Materiales
Porta objetos y cubre objetos
Navaja o escalpelo
Matraz de 250 cm3
Kitasato de 150 cm3 a 500 cm3
Probeta de 100 cm3
Tubo centrífugo de 50 cm3
Amiz NMX 2. 5 M (8 US.) (véase 2)
Tamiz NMX 4. 5 M (14 US.) (véase 2)
5. APARATOS Y EQUIPO5.1 Celda de Howard
5.2 Microscopio
5.3 Ciclón de laboratorio.- Consiste esencialmente de una pantalla de metal cilíndrico con perforaciones en su superficie. En su interior rota una paleta de agitación que impele los componentes suaves de un producto alimenticio forzándolos a salir por las aberturas del cilindro. Los componentes duros como son las son millas, cáscaras, etc., que se...