Método De Kirby-Bauer

1.2. Método de difusión en agar según Kirby Bauer
Es un estudio de susceptibilidad por difusión en disco. Un disco que tiene una cantidad
específica (no concentración) de antimicrobiano, esaplicado a una superficie de agar
inoculado con un microorganismo. El antimicrobiano difunde desde el disco al medio de
cultivo produciendo una zona de inhibición en la cual una concentración crítica deantimicrobiano inhibe el crecimiento bacteriano. La zona de inhibición es medida y se
relaciona inversamente con la CMI.
Esta metodología se encuentra estandarizada para el estudio deEnterobacteriaceas,
Pseudomonas aeruginosas y Acinetobacter spp., Staphylococcus spp., Enterococcus spp.,
Haemophilus spp., Neisseria gonorrhoeae, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus spp.,
Vibrio cholerae.El agar Mueller-Hinton deshidratado se prepara de acuerdo a las

indicaciones del

fabricante.
Después de su esterilización en autoclave se deja enfriar en baño María a 50ºC, se vacía en
placasPetri sobre una superficie plana y asegurando que la profundidad de 4 mm aprox., se
puede dejar enfriar a temperatura ambiente, si no se utiliza el mismo día se debe guardar en
refrigeración a 2-8 ºCpor no más de 7 días.
Se deja un control de esterilidad de placas incubando un período de 24 horas.
El pH debe ser controlado, para este medio de cultivo el pH debe ser de entre 7.2-7.4
después desolidificado, por debajo de este valor el antibiótico perderá potencia mientras
que otros pueden aumentar su actividad.
También se deberá controlar la humedad, no debe haber agua en la tapa de laplaca ni en el
agar, si ésta es grande se debe poner las placas en una estufa a 35ºC por 10-30 mins.
Para preparar la solución estándar 0.5 de McFarland a 0.5 ml de 0.048 mol/l (1.175 % p/v
BaCl2 x2H2O) se le agrega 99.5 ml de 0.18 mol/l (0.36 N)H2SO4 (1% p/v) agitando

constantemente para mantener una suspensión para controlar la densidad se utiliza un
espectrofotómetro la absorbancia a...