Métodos Para Identificar El Adn

MÉTODOS PARA IDENTIFICAR EL ADN
Procedimiento destinado a detectar la presencia, ausencia o variantes de uno o varios segmentos de material genético, lo cual incluye las pruebas indirectas para detectar un producto génico o un metabolito específico que sea indicativo ante todo de un cambio genético determinado.
Los resultados de los análisis genéticos pueden determinar, a los individuos y a susrespectivas familias, si éstos padecen de una determinada enfermedad, si tienen tendencia a enfermar, o si pueden ser portadores de una enfermedad genética.
* Métodos de ensayos de hibridación

* Hibridación en fase liquida
* Hibridación en soporte solido
* Hibridación “dot-blot” y “slot-blot”
* Hibridación de Southem
* Hibridación Northem
* Hibridación in situ
*Hibridación in situ tisular
* Hibridación in situ cromosómica

* Técnicas relacionadas
* Transferencia Western
Explicaremos solo: La Hibridación Fluorescente in situ: FISH
Generalidades
La hibridación fluorescente in situ (FISH) utiliza moléculas fluorescentes para localizar genes o fragmentos de DNA. Esta técnica es especialmente útil para mapear genes o localizar anormalidadescromosómicas. La técnica consiste en preparar cortas secuencias de DNA de una sola hebra, llamadas sondas, que son complementarias de las secuencias de DNA que se quieren marcar y examinar. Estas sondas se "marcan" con moléculas fluorescentes [p.ejemplo con biotina o fluoresceína]. Esta sondas se hibridan o unen al DNA complementario y, como estan marcadas con moléculas fluorescentes, permitenlocalizar las secuencias en las que se encuentran. A diferencia de otras pruebas utilizadas para estudiar los cromosomas que requieren que las células se encuentren en división activa, la hibridación fluorescente in situ puede ser llevada a cabo en células no activas
* La FISH utiliza tres tipos de sonda:
 Sondas específicas de un locus: estas sondas se hibridan a una región particular de un gen.Esta sonda es útil cuando se ha aislado una pequeña parte de un gen y se quiere averiguar en que cromosoma se encuentra.
 Sondas alfoides o centroméricas: son sondas que contienen secuencias complementarias de las secuencias repetidas que se encuentran en los centrómeros de los cromosomas. Como pueden utilizarse sondas de diferentes colores, cada cromosoma puede ser marcado de manera distinta,con lo que se puede averiguar si un individuo tiene el número correcto de cromosomas o si tiene un cromosoma extra
 Sondas para cromosomas completos: son colecciones de sondas de un tamaño reducido, cada una de las cuales se hibrida a una secuencia diferente a lo largo de todo un cromosoma. Utilizando estas librerias de sondas, se puede marcar todo un cromosoma generando un cariotipo espectral.De esta manera, se consiguen imágenes en color que permiten examinar los cariotipos de una forma más exacta que los tradicionales cariotipos basados en bandas más o menos oscuras. Esta técnica es particularmente útil para examinar anormalidades cromosómicas
* FISH de Metafase
La FISH puede usarse sobre células en metafase para detectar microdeleciones específicas más allá de la resolución dela citogenética de rutina o para identificar material extra de origen desconocido.
Puede también ser de ayuda en casos donde es difícil determinar mediante la citogenética de rutina si un cromosoma tiene una deleción simple o está implicado en una reorganización sutil o compleja. Además, la
FISH de metafase puede detectar algunos de los reordenamientos específicos que se observan en ciertoscánceres.
El número de síndromes de microdeleción diagnosticados por FISH está aumentando con rapidez.
La sensibilidad de estos ensayos es en todos los casos mejor que la de la citogenética de rutina, pero depende del síndrome en concreto. En algunos, la sonda es específica para el gen defectuoso, como en el
Síndrome de Williams, donde se ha encontrado una deleción en el gen de la elastina en el...