Métodos Usados En Bioquímica: Espectrofotometría

Informe N°1:
“Métodos usados en bioquímica: Espectrofotometría”

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Integrantes: Andrés Pino
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Profesor (a): Paulina Salas

Asignatura: BioquímicaFecha: 6 de mayo de 2010.



1. INTRODUCCION.


La espectrofotometría es un método analítico que utiliza los efectos de la interacción de las radiaciones electromagnéticas con la materia (átomos y moléculas) para medir la absorción o la transmisión de luz por las sustancias. “Se refiere a los métodos, cuantitativos, de análisis químico que utilizan la luzpara medir la concentración de las sustancias químicas. Se conocen como métodos espectrofotométricos y, según sea la radiación utilizada, como espectrofotometría de absorción visible (colorimetría), ultravioleta, infrarroja”. 4
✓ La espectrofotometría en bioquímica se utiliza por ejemplo para:
✓ Identificar compuestos por su espectro de absorción.
✓ Conocer la concentración de uncompuesto en una disolución.
✓ Determinar la glucosa en sangre en un laboratorio de análisis químico.
✓ Seguir el curso de reacciones químicas y enzimáticas.
“Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energía es absorbida; la energía radiante no puede producir ningún efecto sin ser absorbida. El color de las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas longitudes de onda de laluz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida”.2 “Existen dos tipos de aparatos espectrofotométricos principales:

• Fotómetro o Colorímetro: se caracterizan porque utilizan filtros que solo permiten el paso de una determinada longitud de onda.
• Espectrofotómetros: Instrumento que permite comparar la radiaciónabsorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia, Utilizan cromadores, con ellos se obtiene un haz de luz monocromático cuya longitud de onda se varía a voluntad. Determinan valores de Absorbancia y Tramitancia para sustancias diluidas de acuerdo a los siguientes componentes que lo conforman:• Fuente de luz: Lámpara que emite una mezcla de longitudes de onda.
• Colimador: Conjunto de lentes que enfocan la luz convirtiéndola en un haz de rayos paralelos.
• Monocromador: Dispositivo que selecciona luz de una única longitud de onda.
• Detector fotoeléctrico: Transductor de luz en electricidad. La luz provoca el desplazamiento de electrones en el metaldel detector, produciendo una corriente eléctrica que es proporcional a la intensidad de la luz recibida.
• Registrador: Mide la señal del detector, la compara y genera una medida en una escala determinada”. 4


“Bourguer, Lambert y Beer, a través de sus observaciones establecieron relaciones de la variación de la intensidad de luz transmitida por una muestra con el espesor de ella ocon la concentración de la sustancia, para materiales translúcidos. Estas relaciones se conocen como la ley de Bourguer-Lambert-Beer o ley general de la espectrofotometría que permite hallar la concentración de una especie química a partir de la medida de la intensidad de luz absorbida por la muestra”. 1
“Esta ley se puede expresar en términos de potencia de luz o de intensidad de luz, asumiendoluz monocromática, como: It / I0 = 10 -e bc
 Donde: It, es la intensidad de la luz transmitida por la muestra.
I0, es la intensidad de la luz que incide sobre la muestra (fuente).
e, es el coeficiente de absortividad molar en unidades de M-3. cm-1
b, el espesor de la celda en cm o lo que se conoce como paso óptico.
La relación It / I0 se...