negocio

IDENTIFICACIÓN Y MEDICIÓN
DE LA RESPUESTA INMUNE

RESPUESTA INMUNE HUMORAL
SEROLOGÍA
suero

estudio

“Ciencia de la detección de anticuerpos”

Medición de las interacciones Ag - Ac, con fines
diagnósticos, a partir del suero de un animal.

Sensibilidad
Capacidad de una prueba para detectar animales “enfermos”
(VERDADEROS POSITIVOS) en una población “enferma”.
Ejs.BPA-ELISA-WESTERN BLOTTING-INMUNOFLUORESCENCIA

Especificidad
Capacidad de una prueba para detectar animales “sanos”
(VERDADEROS NEGATIVOS) en una población “sana”.
Ejs. IDGA- WESTERN BLOTTING

Prueba

Animal
ENFERMO

SANO

+

Positivo
verdadero

Falso positivo

-

Falso negativo

Negativo
verdadero

CLASIFICACIÓN DE PRUEBAS PARA MEDIR LA RESPUESTA INMUNE
HUMORAL

1.PRIMARIAS

Miden la cantidad de complejo Ag-Ac formado

2. SECUNDARIAS

Miden las consecuencias de la unión Ag-Ac in
vitro

3. TERCIARIAS

Miden las consecuencias o el efecto
protector de anticuerpos en el animal (in
vivo)

Evolución de los anticuerpos contra Brucella abortus
1800
1600

Ig M

1400
1200

Post-infección
Natural

1000
800

Ig G

600
400
200
0

0

30Post- Vacunación
B. abortus cepa 19

60

90

0
12

0
15

0
18

0
21

1800
1600
1400
1200
1000

0
24

0
27

0
30

0
33

0
36

Ig M

800
600
400
200
0

Ig G
0

15

30

45

60

75

90

5
10

0
12

5
13

0
15

5
16

0
18

Respuesta inmune humoral
Brucella abortus
Isotipo

Cantidad

Presencia

CaracterísticasIgM
IgG1
IgG2
IgA

Abundante
Abundante
Escasa
Abundante

Temporaria
Continua
Discontinua
Discontinua

Inespecífica ?
Específica
Específica
Específica

APLICACIONES EN R. A.

BRUCELOSIS BOVINA
Resolución 438/2006 del SENASA.

Prueba
TAMIZ
COMPLEMENTARIAS

BPA – ELISA I
SAT + 2-ME – FPA
ELISA C

DEFINITORIA
VIGILANCIA
EPIDEMIOLÓGICA

FC
PAL - ELISA IPRUEBAS INMUNOENZIMÁTICAS
ELISA

Fundamento: visualización de la cantidad de Ag-Ac formado a
través de marcadores ligados a enzimas, que en presencia del
sustrato específico, producen una reacción colorimétrica.

ENZIMAS UTILIZADAS

SUSTRATO

• PEROXIDASA

• ortofenildiamina

• Fosfatasa alcalina

• paranitrofenilfosfato

ELISA
Tipos de pruebas

INDIRECTA

SANDWICHdetección de
ANTICUERPO

detección de
ANTÍGENO

COMPETICIÓN

detección de
ANTICUERPO

ELISA INDIRECTO

Lavado
ANTÍGENO
adsorbido
(reactivo)

Lavado
Suero
PROBLEMA

Lavado

ANTIGLOBULINA
marcada con
ENZIMA (reactivo)

Detección de ANTICUERPOS

SUSTRATO de la
enzima (reactivo)

CAMBIO DE COLOR

ELISA COMPETICIÓN
COLOR

Lavado

Lavado

Ac
monoclonal

Conj.con
enzima
peroxidasa

Y

P
O
S
I
T
I
V
O

Suero
Problema

Lavado

Y

Antígeno

Lavado

Y

Lavado

Lavado

Lavado

Sustrato
cromógeno

Y

N
E
G
A
T
I
V
O

Lavado

AUSENCIA DE COLOR

ELISA

VENTAJAS

DESVENTAJAS

§ Alta sensibilidad y especificidad
§ Rápido
§ Reactivos estables

§ Costo microplacas
§ Costo equipo automatización

§Resultado visual

APLICACIONES EN VETERINARIA

§ Brucelosis

§Bia

§ Babesia

§ IBR

§Leucemia felina

§ Trichinella

§ BVD

§Salmonella

§ Toxoplasma

§ Peste porcina

§Aftosa

§ Toxocara

§ Aujesky

§Estreptococos

§ Hormonas

§ Newcastle

§TBC

§ Micotoxinas

§ Cuantificación de
inmunoglobulinas

PRUEBAS SECUNDARIAS

La prueba a realizar depende delas
características del Ag
§ SOLUBLE
§ PARTICULADO

PRECIPITACIÓN

AGLUTINACIÓN

§ SUPERFICIE + COMPLEMENTO

FIJACIÓN DE
COMPLEMENTO

Comparación precipitación - aglutinación

Y

Antígeno
PARTICULADO

Anticuerpo

Formación de “retículo”

PRECIPITACIÓN

“Amontonamiento”

AGLUTINACIÓN

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Y

Antígeno
SOLUBLE

Y

Y

AGLUTINACIÓN...