NMX F 253 1977

RECOPILADO POR:
EL PROGRAMA UNIVERSITARIO DE ALIMENTOS

NMX-F-253-1977. CUENTA DE BACTERIAS MESOFILICAS AEROBIAS.
METHOD FOR AEROBIC MESOPHYLIC BACTERIA COUNT. NORMAS
MEXICANAS. DIRECCIÓN GENERAL DE NORMAS.
PREFACIO
En la elaboración de esta Norma participaron los siguientes Organismos:
Dirección General de Investigación en Salud Pública de la Secretaría de Salubridad y
Asistencia.
DirecciónGeneral de Control de Alimentos, Bebidas y Medicamentos de la Secretaría
de Salubridad y Asistencia.
Microbiología Especializada.
Centro de Control Total de Calidades.
Asociación de Técnicos en Alimentos de México.
0. INTRODUCCIÓN
Cuando se pretende investigar el contenido de microorganismos viables en un alimento,
la técnica más comúnmente utilizada es el recuento en placa. Esta técnica se aplicapara
una gran variedad de microorganismos y su fundamento consiste en contar las colonias
que desarrollan en el medio de elección después de cierto tiempo y temperatura de
incubación presuponiendo que cada colonia proviene de un microorganismo en la
muestra bajo estudio. El método admite numerosas fuentes de variación, algunas de
ellas controlables, pero sujetas a la influencia de varios factores.
Enrealidad esta técnica no pretende poner en evidencia todos los microorganismos
presentes. La variedad de especies y tipos diferenciales por sus distintas necesidades
nutricionales, temperatura requerida para su crecimiento, oxígeno disponible, etc., hacen
que el número de colonias contadas constituyan una estimación de la cifra realmente
presente. No obstante, la ejecución de la técnica cuando sesiguen fielmente las
condiciones que se señalan para su desarrollo puede llegar a proporcionar resultados lo
bastante reproducibles para darle significado a la prueba.
1.

OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACIÓN

Esta Norma establece un método para estimar la cantidad de bacterias mesofílicas
aerobias en un alimento.
2.

REFERENCIAS

Para la correcta aplicación de esta Norma, se deben consultar lassiguientes Normas
Mexicanas en vigor:
NMX-F-285
NMX-F-286

Muestreo y transporte de muestras de alimentos para su análisis y
microbiológico.
Preparación y dilución de muestras de alimentos para análisis
microbiológicos.

3.
a)
b)
c)
d)
e)
f)
g)
h)
i)
j)

MATERIAL Y EQUIPO
Horno para esterilizar.
Autoclave con termómetro, o manómetro probado con termómetro de máximas.
Baño maría con termostato ytermómetro.
Licuadora de una o dos velocidades controladas por un reóstato con vasos
esterilizables.
Vasos esterilizables para licuadora.
Balanza granataria con sensibilidad de 0.1 g.
Incubadora con termostato que evite variaciones mayores de ± 0.5°C
Utensilios estériles para la preparación de las muestras: cuchillos, pinzas, tijeras,
cucharas, espátulas.
Pipetas bacteriológicas estériles de 10 y 1 mlgraduadas en 0.1 y 0.01 ml
respectivamente.
Frascos de dilución de vidrio para contener 99 ó 90 ml, ó tubos de 16 x 150 mm on
tapón de rosca para contener 9 ml de solución reguladora diluyente, en ambos casos
± 1% del volumen señalado después de la esterilización cerrados herméticamente.

4.

MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS

a)

Solución reguladora diluyente

Solución concentrada
KH2PO4 34 gramos
Aguadestilada 500 mililitros
Disolver el fosfato en agua destilada y ajustar el pH a 7.2 con Hidróxido de Sodio IN.
Llevar a un litro con agua destilada. Esterilizar durante 20 minutos a 121°C. Conservar
en refrigeración. Tomar 1.25 ml de solución concentrada y llevar a un litro con agua
destilada, ésta es la solución de trabajo. Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 ml según
se requiera. Esterilizara 121°C durante 20 minutos.
El pH final debe ser 7.2
b)

Agar – Triptona - Extracto de Levadura (agar cuenta estándar)

Extracto de levadura 2.5 gramos
Triptona 5 gramos
Dextrosa (D-glucosa) 1 gramos
Agar 15 gramos
Agua destilada 1,000 mililitros
Suspender 24 gramos del medio deshidratado en un litro de agua. Hervir hasta total
disolución. Distribuir en volúmenes de 100 y 200 ml. Esterilizar a...